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HT115(DE3) 感受态细胞培养操作规程

2022-06-15
HT115(DE3) 感受态细胞培养操作规程:
一.培养基及培养冻存条件准备:
1)准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640:GIBCO,货号21875-091),90%;优质胎牛血清,10%。
2)培养条件: 气相:空气,95%;二氧化碳,5%。 温度:37℃,培养箱湿度为70%-80%。
3)冻存液:90%血清,10%DMSO,现用现配,液氮储存。
二.细胞处理:
1)复苏细胞:将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于冻存管盖部)摇晃解冻,移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。
2)细胞传代:如果细胞密度达80%-90%,即可进行传代培养。
对于悬浮细胞,传代可参考以下方法:

方法一:收集细胞,1000RPM,常温条件下离心5分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养液后吹匀,将细胞悬液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。

人脑静脉血管平滑肌细胞完全培养基
人脑膜细胞完全培养基
人神经元细胞完全培养基
人神经少突起前质胶质细胞完全培养基
人神经星形胶质细胞完全培养基
人神经小胶质细胞完全培养基
人脑微血管内皮细胞完全培养基
人脑成纤维细胞完全培养基
人小脑颗粒细胞完全培养基
人晶状体上皮细胞完全培养基
人角膜上皮细胞完全培养基
人视网膜色素上皮细胞完全培养基
人视网膜微血管内皮细胞完全培养基
人角膜成纤维细胞完全培养基
人小梁网细胞完全培养基
人视网膜muller细胞完全培养基
人角膜内皮细胞完全培养基
人脉络膜微血管细胞完全培养基
人牙周膜成纤维细胞完全培养基
大鼠肺微血管内皮细胞完全培养基
大鼠肺血管平滑肌细胞完全培养基