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VERO细胞衍生株细胞培养步骤

2022-12-07

VERO细胞衍生株细胞培养步骤：
产品仅用于科研一．培养基及培养冻存条件准备：
1）准备MEM培养基(MEM:GIBCO,货号11095-080)，85%；北美胎牛血清(United States，GIBCO，货号16000-044)，15%。
2）培养条件：气相：空气，95%；二氧化碳，5%。温度：37摄氏度，培养箱湿度为70%-80%。
3）冻存液：90%完全培养基，10%DMSO，现用现配。液氮储存。
二．细胞处理：
1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入10cm皿中，加入约8ml培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。
2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
1.弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2.加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。
3.按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。
4.将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。

3）细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。贴壁细胞冻存时，弃去培养基后加入少量胰酶，细胞变圆脱落后，加入约1ml含血清的培养基后加入冻存管中，再添加10%DMSO后进行冻存。

重楼皂苷I Chonglou saponin I 50773-41-6
重楼皂苷II Polyphyllin II 76296-72-5
竹叶香附素A Raddeanin(Anemodeanin) A 89412-79-3
梓醇 Catalpol 2415-24-9
紫草素 Shikonin 517-89-5，54952-43-1
紫草酸 lithospermic acid 28831-65-4
紫丁香苷 Syringin 118-34-3
紫花前胡素 Decursin 5928-25-6
紫堇灵 Corynoline 18797-79-0
紫杉醇 Paclitaxel 33069-62-4
紫杉叶素 Taxifolin 480-18-2
紫菀酮 Shionone 10376-48-4
紫芸英苷 Astragalin 480-10-4
醉鱼草皂苷Ⅳb Clinopodiside A 142809-89-0
正丁基苯酞 3-n-Butylphthalide 6066-49-5
棕榈酸 palmitic acid 1957/10/3
知母皂苷E Anemarsaponin E 136565-73-6
紫檀芪 Pterostilbene 537-42-8
异欧前胡素 Isoimperatorin 482-45-1
异嗪皮啶 Isofraxidin 486-21-5
异鼠李素 Isorhamnetin 480-19-3

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