今年天与大家分享悬浮细胞成簇或者成团的原因及解决方法
2025-05-27
在细胞培养的微观世界中，悬浮细胞成簇现象宛如一场精妙的生命交响曲。这些原本应该独立悬浮的细胞，在特定培养条件下会自发聚集，形成大小不一的细胞团块，犹如夜空中璀璨的星团般引人注目。这种现象在生物制药领域尤为常见，特别是在CHO细胞、HEK293细胞等常用工程细胞系的大规模培养过程中。
从细胞生物学角度来看，这种成簇行为是细胞间相互作用的多维度体现。以下是悬浮细胞成簇或者成团的原因及解决方法
可能原因： 1、培养液中含钙、镁离子 ； 2、支原体污染； 3、蛋白酶过度消化使得细胞裂解； 4、DNA污染 。
解决方法： 1、用无钙镁平衡盐溶液洗涤细胞，轻巧吹吸细胞获得单细胞悬液； 2、分离培养物，检测支原体； 3、用DNaseI(胰脱氧核糖核酸酶)处理细胞。针对悬浮细胞成簇或成团的问题，除了上述原因和解决方法外，还需结合实验操作细节和细胞特性进一步优化方案。
若细胞因钙、镁离子导致聚集，可尝试在消化后加入EDTA（乙二胺四乙酸）以螯合金属离子，减少细胞间黏附。同时，吹打细胞时建议使用孔径较小的移液枪头，避免机械损伤，并采用低速离心（如200g，5分钟）帮助细胞温和沉淀。
支原体污染常伴随细胞生长缓慢或形态异常。若检测确认污染，除常规抗生素处理外，可考虑使用支原体清除试剂（如Plasmocin），并定期进行PCR检测以防复发。短期处理无效时，建议冻存重要细胞株并重新构建无菌培养体系。
对于蛋白酶消化过度的问题，需根据细胞类型调整消化时间与酶浓度。例如，某些敏感细胞可改用低浓度胰酶（0.05%）或胶原酶替代，并在消化后立即用含血清培养基终止反应。此外，定期检查消化液的活性，避免反复冻融导致效价下降。
DNA污染的处理中，DNase I的使用需注意浓度与孵育时间（通常1-10 μg/mL，37℃作用15-30分钟），处理后需彻底洗涤以避免残留酶影响后续实验。若细胞团块仍顽固，可尝试40 μm细胞筛过滤，但需评估筛网对细胞的剪切力影响。
培养环境的稳定性也至关重要。保持恒定的pH（7.2-7.4）、温度（±0.5℃波动）及定期更换新鲜培养基，能减少细胞应激性聚集。对于某些特殊细胞系（如杂交瘤细胞），添加抗聚集成剂（如聚乙烯吡咯烷酮，PVP）可能改善分散性。
通过多维度排查和精细化操作，可显著提升悬浮细胞的单细胞率，为后续实验提供更均一的样本基础。
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