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人类粒细胞系；HumanCellline1D3培养前的准备工作
2025-06-18
1D3细胞为悬浮生长，建议使用RPMI-1640培养基（含10%胎牛血清、1%青霉素-链霉素）进行常规培养。培养前需确保超净工作台紫外灭菌30分钟，所有操作器械（移液器、枪头、培养瓶等）均经过高压灭菌处理。细胞复苏时需提前将培养基置于37℃水浴预热，冻存管从液氮中取出后立即放入37℃水浴快速解冻，离心（1000rpm, 5分钟）去除冻存液后重悬于新鲜培养基中，接种于T25培养瓶，置于37℃、5% CO?培养箱中静置培养。
传代与扩增
当细胞密度达到1×10?/mL时需进行传代。轻轻吹打混匀细胞悬液，按1:2至1:3比例分装至新培养瓶，补充预热培养基至总体积5mL。若需大规模扩增，可逐级放大至T75培养瓶或细胞工厂，但需注意保持接种密度不低于5×10?/mL，以避免生长滞缓。
冻存与质量控制
选择对数生长期细胞，离心后以冻存液（90%血清+10% DMSO）重悬至5×10?/mL，分装至冻存管，程序降温后转入液氮长期保存。定期检测细胞活力（台盼蓝拒染法＞95%）和支原体污染（PCR法），并通过流式细胞术验证表面标志物CD15、CD11b的表达以确认细胞系特性。
注意事项
1. 换液时避免剧烈震荡，防止机械损伤；
2. 若出现异常聚团，可用40μm细胞筛过滤；
3. 每3代进行一次STR鉴定，确保细胞遗传稳定性。
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