大鼠肺大动脉内皮细胞使用方法
2025-07-30
大鼠肺大动脉内皮细胞使用方法:
在技术部标准操作流程下，小鼠棕色脂肪细胞不建议传代；建议您收到细胞后尽快进行相关实验。
客户收到细胞后，请按照以下方法进行操作。
1、取出25cm2培养瓶，75%酒精消毒，拆下封口膜，放入37℃，5%CO2细胞培养箱中静置3-4h，以稳定细胞状态；
2、待细胞达到80%汇合时准备进行传代培养；
3、细胞传代
1） 吸出25cm2培养瓶中的培养基，用PBS清洗细胞一次；
2） 添加0.25%胰蛋白酶消化液约1ml至培养瓶中，37℃温浴3min左右；倒置显微镜下观察，待细胞回缩变圆后吸弃消化液，再加入完全培养液终止消化；
3） 用吸管轻轻吹打混匀，按1：2适当的比例进行接种传代，然后补充新鲜的完全培养基至5ml，放入37℃，5%CO2细胞培养箱中培养；
4）待细胞完全贴壁后，培养观察。之后每隔2-3天更换新鲜的完全培养基。**续写内容：**
4、注意事项
1）细胞传代时需严格控制消化时间，避免过度消化导致细胞损伤。若消化不完全，可适当延长消化时间，但需密切观察细胞形态变化。
2）吹打细胞时动作应轻柔，避免产生过多气泡，以免影响细胞存活率。
3）传代比例可根据实验需求调整，但建议不超过1:3，以确保细胞生长状态稳定。
5、冻存与复苏（若需长期保存）
1）待细胞生长至对数生长期时，消化收集细胞，离心后加入适量冻存液（含10%DMSO的完全培养基），分装至冻存管中。
2）采用程序降温法（如4℃ 30min，-20℃ 1h，-80℃过夜）后转入液氮长期保存。
3）复苏时，迅速将冻存管置于37℃水浴中融化，离心去除冻存液后，用完全培养基重悬细胞并接种至培养瓶。
6、实验建议
1）若细胞状态不佳（如贴壁率低、生长缓慢），可适当增加血清浓度（不超过20%）或更换新鲜培养基。
2）定期检测细胞是否污染（如培养基浑浊、pH异常），若有污染迹象，应立即终止培养并彻底消毒操作环境。
7、常见问题解答
Q：细胞传代后为何迟迟不贴壁？
A：可能因消化过度或吹打力度过大导致细胞损伤，建议优化消化时间并轻柔操作。
Q：培养基频繁变黄是否正常？
A：若细胞密度较高，代谢旺盛会导致培养基酸化，需及时更换；若细胞量少仍频繁变黄，需排查污染可能。
公司动态