公司动态
 
首页 > 公司动态  >  猪端粒酶(TE)ELISA检测试剂...

猪端粒酶(TE)ELISA检测试剂盒的技术原理

2025-09-26

      猪端粒酶(TE)ELISA检测试剂盒通过双抗体夹心法实现高特异性定量检测。其核心在于利用抗猪TE单克隆抗体包被微孔板,形成固相捕获体系。当样本中的TE与包被抗体结合后,加入辣根过氧化物酶(HRP)标记的检测抗体,形成"抗体-抗原-酶标抗体"复合物。通过TMB底物显色反应,最终在450nm波长下测定吸光度值,其强度与TE浓度呈正相关。

检测原理

?双抗体夹心法?
采用捕获抗体(包被在微孔板)和检测抗体(酶标记)双重识别端粒酶催化亚基TERT,通过夹心结构提高特异性?。

典型反应链:固相抗体-TERT-酶标抗体-底物显色,显色强度与TERT浓度正相关?。

?荧光定量PCR辅助验证?

部分试剂盒结合qPCR技术,通过TaqMan探针法检测TERT基因表达量(FAM/Cy5双通道),以ΔΔCT法实现绝对定量?。

技术特点
?高灵敏度?:可检测pg/mL级端粒酶活性,双色探针设计降低背景干扰?
?种属通用性?:适用于猪、大鼠、豚鼠等多种动物样本(血清/组织裂解液)?
?标准化操作?:全程闭管反应,避免交叉污染,含内参基因(如GAPDH)校正假阴性?
三、操作流程
?样本处理?:Trizol法提取RNA,逆转录为cDNA?
?ELISA反应?:
包被抗体孵育(4℃过夜)
加入待测样本及酶标二抗(37℃ 1h)
TMB底物显色(OD450nm读数)?
?数据分析?:标准曲线法计算TERT浓度?
四、注意事项
?样本保存?:血清需-20℃冻存,避免反复冻融?
?质控要求?:设置阳性(293T细胞)和阴性(MRC-5细胞)对照?。
?干扰因素?:溶血样本可能影响结果准确性?。