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如何确定ELISA的最佳稀释倍数？
2025-11-06
试剂盒性能匹配?
稀释后样本的OD值应落在标准曲线最高值OD值的半量程内（如标准品最高OD=2.4时，目标OD≈1.2），此时计算误差最小?。
标准曲线范围需覆盖样本预期浓度，否则需调整稀释比例?。
?实验设计需求?
横向比较实验需统一所有样本的稀释倍数，消除基质差异?。
时间梯度实验可预设差异稀释方案（如0h 1:10，24h 1:100）?。
操作流程
?预实验与梯度稀释?
通过预实验初步判断样本浓度范围，设置梯度稀释（如1:10、1:50、1:100、1:200）?。
大比例稀释（如200倍）分步进行：先10倍稀释，再基于此稀释20倍?。
?检测与验证?
同步检测标准品与待测样本，确保操作一致性?。
若样本OD值超出标准曲线范围，需稀释后重新检测?。
?数据计算?
将样本OD值代入标准曲线拟合方程，计算浓度后乘以稀释倍数?。
使用专业软件（如ELISA Calc、GraphPad Prism）可提升计算精度?。
常见问题处理
?假阳性?：类风湿因子干扰样本可加热灭活（100℃ 1分钟）?。
?信号异常?：溶血样本需弃用，EDTA浓度需<5 mM?。
?基质干扰?：血清样本建议4℃静置离心去除纤维蛋白?。
通过规范操作和梯度稀释策略，可确保检测结果落在标准曲线线性范围内，显著提升数据可靠性?。
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