大鼠原代角膜成纤维细胞注意事项
2025-11-18
大鼠原代角膜成纤维细胞注意事项：
该细胞只可用于科研。出现以下情况不予以重发：客户造成细胞污染；客户不正确操作致细胞状态不好；细胞状态不好，未提供细胞培养前3天照片；细胞培养时经其它处理；细胞收到2天内，未告知相关情况。在收到大鼠原代角膜成纤维细胞后，为确保实验顺利进行，需特别注意以下操作细节：
培养环境优化
建议使用含10%胎牛血清的DMEM/F12培养基，并添加1%双抗溶液。培养箱环境需严格维持37℃、5% CO?及95%湿度。首次传代时，细胞贴壁可能较慢，建议延长静置时间至24小时后再观察，避免频繁移动培养瓶干扰贴壁过程。
污染防控关键点
操作前需用75%乙醇擦拭超净台，所有试剂需经0.22μm滤膜过滤。若发现培养基浑浊或细胞形态异常（如颗粒增多、空泡化），应立即终止培养，并对操作台进行彻底消毒。特别注意支原体污染风险，建议定期用PCR法检测。
传代操作规范
消化时建议采用0.25%胰酶-EDTA混合液（1:1），镜下观察到细胞间隙增大后立即加入含血清培养基终止反应。离心速度控制在300g以内，避免机械损伤。传代比例推荐1:2至1:3，原代细胞代数建议不超过P5代。
冻存与复苏要点
冻存液需现配现用（90%血清+10%DMSO），程序性降温后转入液氮。复苏时需快速水浴解冻，首次换液应在细胞完全贴壁后（约6小时）进行，避免漂浮细胞被误弃。建议每批次保留2管备份细胞。
数据记录要求
每日需拍摄100倍相差显微镜照片，重点记录细胞密度、突触延伸情况及背景洁净度。若用于药物实验，需在加药前24小时完成细胞铺板，确保达到80%汇合度。所有异常状态需在48小时内以图文形式反馈。
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