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FAS活性测定中标准曲线的建立步骤
2025-12-24
FAS活性测定中标准曲线的建立是实验的核心环节，直接关系到结果的准确性。
一、标准曲线建立步骤
?标准液浓度选择?
建议选择5种浓度，覆盖待测样品的可能变异范围，浓度差距最好成倍或等级增加。
例如：0.8 IU/ml、4 IU/ml、20 IU/ml、40 IU/ml、50 IU/ml（参考ELISA试剂盒检测范围）。
?标准液测定?
每个浓度点至少重复2次，读取光密度（OD值）并取平均值，以减少仪器误差。
?标准曲线绘制?
以标准物浓度为横坐标，OD值为纵坐标，绘制标准曲线。
若符合Lambert-Beer定律，曲线应通过原点且为直线；若点不在一直线，可通过原点尽可能使直线通过更多点，使点均匀分布在直线两侧。
二、标准曲线核心要求
?浓度范围?：应覆盖正常操作条件下的被测量范围。
?标准样品组分?：尽量与被测样品组分一致，减少基体干扰。
?浓度分布?：标准样品浓度值应等距离的分布在被测量范围内。
?重复性?：每个标准点至少重复2次，从稀释开始。
三、注意事项
?仪器与试剂?：更换仪器、移动位置、调换试剂或室温明显改变时，需重新绘制标准曲线。
?标准曲线保存?：绘制好的标准曲线仅适用于相同条件下操作测定相同物质时使用。
?结果计算?：以标准物活性为横坐标，OD值为纵坐标，绘制标准曲线，根据样品OD值查得活性，再乘以稀释倍数。
四、示例标准曲线参数
?检测范围?：0.8 IU/ml - 50 IU/ml。
?线性回归?：样品线性回归与预期浓度相关系数R值应≥0.99。
?批内与批间差异?：批内CV值应<9%，批间CV值应<15%
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