PCR实验方法步骤：

方法

1：在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。     

10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix （2mM）             

4 μl     引物1（10pM）                 

2 μl     引物2（10pM）                 

2 μl     Taq酶 （2U/μl）               

1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  

1 μl      加ddH2O至 50 μl  

视PCR仪有无热盖，产品仅用于科研不加或添加石蜡油。

2：调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，在72℃ 保温7min。

3：结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。

4：PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μl进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。

PCR反应鉴定——PCR反应条件:

荧光定量PCR检测方法包括以下步骤：

(1)产品仅用于科研将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线；

(2)待测样本与步骤(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。

其中步骤(1)为：将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线。

其中所述参照基因为本领域常规参照基因，较佳地管家基因，优选地为RPPH1的扩增区域，其中所述质粒载体为本领域常规质粒载体，较佳地为PCR克隆载体，优选地为TA cloning载体，所述TA cloning载体较佳地为pMD18-T载体。其中所述标准品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例较佳地为1：1。由于标准品中待测目的基因与参照基因的比例为1:1，解决了目前相对标准曲线法应用中目的基因与参照基因的浓度比例关系难以控制的问题，提高HER2基因扩增检测的可靠性。步骤(2)为：待测样本与步(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。

其中所述待测目的基因为本领域常规待测目的基因，较佳地为或者疾病的特异性基因，更佳地为HER2基因的扩增区域，所述荧光定量PCR扩增为本领域常规荧光定量PCR扩增方法，所述荧光定量PCR扩增方法较佳地为多通道荧光定量PCR扩增，更佳地为双通道荧光定量PCR扩增。
客户只需提供样品和待检测名称即可。由我们提取RNA，设计并合成引物，完成荧光定量PCR实验以及后续数据分析，提供实验报告给您。
以下列是公司正在热销的产品：

藻苔金黄杆菌Aβ40 (Amyloid Beta 40) ELISA Kit拉丁属名: Chryseobacterium takakiae sp. nov.

弱黄色粘球菌Aβ42 (Amyloid Beta 42) ELISA Kit拉丁属名: Myxococcus xanthus

Pseudomonas argentinensis SOD1( Superoxide Dismutase 1, Soluble) ELISA Kit注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

小白孢枝瑚菌ANG I (Angiotensin I) ELISA Kit注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

ANG II (Angiotensin II) ELISA Kit拉丁属名: Achromobacter piechaudii

泡盛曲霉NOS1/nNOS (Nitric Oxide Synthase 1, Neuronal) ELISA Kit拉丁属名: Aspergillus awamori

匍匐曲霉原变种ApoC3 (Apolipoprotein C3) ELISA Kit拉丁属名: Aspergillus repens var. repens

假丝酵母属EGFR (Epidermal Growth Factor Receptor) ELISA Kit拉丁属名: Candida sp.

猴头菇PCT (Procalcitonin) ELISA Kit注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

白僵菌AFGF/FGF1 (Acidic Fibroblast Growth Factor 1) ELISA Kit用途: 害虫生物防治

肠沙门氏菌肠亚种伤寒血清型APLN (Apelin) ELISA Kit拉丁属名: Salmonella  enterica subsp. enterica serovar Typhi

酵母属MMP-11 (Matrix Metalloproteinase 11) ELISA Kit 拉丁属名: Saccharomyces  sp.

短密青霉COL2α1 (Collagen Type II Alpha 1) ELISA Kit注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

瑞氏假丝酵母IL-12 p35 (Interleukin 12 p35) ELISA Kit拉丁属名: Candida reukaufii

木拉克酵母属拉丁属名: Mrakia  blollopis
雅氏瓦螨探针法荧光定量PCR试剂盒 Rhesus antibody Rh phospho-Androgen Receptor (Ser212) 磷酸化雄激素受体 规格 0.1ml

Pancreatic Polypeptide 浓缩液 0.1ml 进口分装

UCHL3 英文名称： 泛素硫酯酶L3 0.2ml

Dmrta1 英文名称： 性发育转录因子蛋白DMO 0.1ml

Anti-ATF6 活化转录因子6Multi-class antibodies规格： 0.1ml

EED 英文名称： 胚胎外胚层发育蛋白EED 0.2ml

干细胞生长因子 Anti-SCF 0.2ml

CD1A 英文名称： T淋巴细胞CD1A 0.1ml

Anti-phospho-ASK1(Ser967) 磷酸化细胞凋亡信号调节激酶1Multi-class antibodies规格： 0.2ml

HSP gp96(Human Heat Shock Protein glycoprotein 96) ELISA Kit 人热休克蛋白糖蛋白96Multi-class antibodies规格： 48T

Anti-Phospho-p90RSK (Thr359/Ser363) 磷酸化丝氨酸/苏氨酸激酶p90RSK蛋白Multi-class antibodies规格： 0.1ml

Rhesus antibody Rh HRG Beta1 Heregulin β蛋白 规格 0.1ml

EGF ELISA Kit 大鼠表皮生长因子 96T

PRKCDBP 英文名称： 蛋白激酶C delta结合蛋白 0.2ml

人抗胶原蛋白(CLA)ELISA试剂盒英文名称：Human Collagen autoantibody,CLA ELISA Kit特价促销

人抗角蛋白(AKA)ELISA试剂盒英文名称：Human Anti-keratin antibody,AKA ELISA Kit特价供应

人抗角蛋白丝聚集素/丝集蛋白(AFA)ELISA试剂盒英文名称：Human anti-filaggrin antibody,AFA ELISA Kit特价供应

人抗(AsAb)ELISA试剂盒英文名称：Human anti-sperm antibody，AsAb ELISA Kit进口/原装

人抗酒石酸酸性磷酸酶5b(TRACP-5b)ELISA试剂盒英文名称：Human tartrate-resistant acid phosphatase 5b，TRACP-5b ELISA Kit进口/原装

OCLN(Occluding) 咬合蛋白抗原Multi-class antibodies规格： 0.5mg

Anti-Aromatase 芳香化酶/细胞色素P450/雌激素合成酶Multi-class antibodies规格： 0.1ml

Crk p38 英文名称： Crk p38 0.2ml

Anti-IL-17 白介素-17(人)Multi-class antibodies规格： 0.2ml

TNF- Alpha(Human Tumor necrosis factor Alpha) ELISA KIT 人坏死因子αMulti-class antibodies规格： 48T

Anti-GLI1 下游转录因子Gli1蛋白Multi-class antibodies规格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh Mouse Anti-Goat IgG/Gold 胶体金标记的小鼠抗羊IgG 规格 2ml

b-FABP(Human brain fatty acid binding protein) ELISA Kit 人脑型脂肪酸结合蛋白 96T

Rab17 英文名称： RAS癌基因相关蛋白RAB17 0.2ml