客户只需提供样品和待检测名称即可。由我们提取RNA,设计并合成引物,完成荧光定量PCR实验以及后续数据分析,提供实验报告给您。
产品名称 | 英文名称 | 货号 |
乳酸杆菌探针法荧光定量PCR试剂盒说明书 | LZR4263 |
PCR实验方法步骤:
方法
1:在冰浴中,按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
10×PCR buffer
5 μl dNTP mix (2mM)
4 μl 引物1(10pM)
2 μl 引物2(10pM)
2 μl Taq酶 (2U/μl)
1 μl DNA模板(50ng-1μg/μl)
1 μl 加ddH2O至 50 μl
视PCR仪有无热盖,产品仅用于科研不加或添加石蜡油。
2:调整好反应程序。将上述混合液稍加离心,立即置PCR仪上,执行扩增。一般:在93℃预变性3-5min,进入循环扩增阶段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循环30-35次,在72℃ 保温7min。
3:结束反应,PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4:PCR的电泳检测:如在反应管中加有石蜡油,需用100μl进行抽提反应混合液,以除去石蜡油;否则,直接取5-10μl电泳检测。
PCR反应鉴定——PCR反应条件:
循环步骤 | 温度 | 时间 | 循环数 |
预变性 | 94℃ | 5 min | 1 |
变性 | 94℃ | 10 sec | 30-40 |
退火 | 50-65℃ | 20 sec | 30-40 |
延伸 | 72℃ | 30 sec/kb | 30-40 |
终延伸 | 72℃ | 5 min | 1 |
荧光定量PCR检测方法包括以下步骤:
(1)产品仅用于科研将参照基因与待测目的基因片段等比例连接,克隆到同一个质粒载体上,构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品,并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线;
(2)待测样本与步骤(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后,目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数,计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值,即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。
其中步骤(1)为:将参照基因与待测目的基因片段等比例连接,克隆到同一个质粒载体上,构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品,并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线。
其中所述参照基因为本领域常规参照基因,较佳地管家基因,优选地为RPPH1的扩增区域,其中所述质粒载体为本领域常规质粒载体,较佳地为PCR克隆载体,优选地为TA cloning载体,所述TA cloning载体较佳地为pMD18-T载体。其中所述标准品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例较佳地为1:1。由于标准品中待测目的基因与参照基因的比例为1:1,解决了目前相对标准曲线法应用中目的基因与参照基因的浓度比例关系难以控制的问题,提高HER2基因扩增检测的可靠性。步骤(2)为:待测样本与步(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后,目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数,计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值,即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。
其中所述待测目的基因为本领域常规待测目的基因,较佳地为或者疾病的特异性基因,更佳地为HER2基因的扩增区域,所述荧光定量PCR扩增为本领域常规荧光定量PCR扩增方法,所述荧光定量PCR扩增方法较佳地为多通道荧光定量PCR扩增,更佳地为双通道荧光定量PCR扩增。
以下列是公司正在热销的产品:
黑曲霉拉丁属名: Aspergillus niger
粘质沙雷氏菌拉丁属名: Serratia marcescens
褶皱曲霉拉丁属名: Aspergillus rugulosus
产灰色链霉菌拉丁属名: Streptomyces cinerochromogenes
枯草芽孢杆菌拉丁属名: Bacillus subtilis
柠条根瘤菌用途: 与柠条共生固氮
柠檬两面神菌拉丁属名: Janibacter melonis
粉红聚端孢霉用途: 代谢产物
松杉灵芝注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的,不可用于人类或动物的临床诊断或,非药用,非食用
双孢蘑菇拉丁属名: Agaricus bisporus
双孢蘑菇注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的,不可用于人类或动物的临床诊断或,非药用,非食用
榛针孢酵母拉丁属名: Nematospora coryli
平菇—465用途: 食用菌
玫瑰单胞菌拉丁属名: Roseomonas eburnea?sp. nov.
糙皮侧耳拉丁属名: Pleurotus ostreatus
乳酸杆菌探针法荧光定量PCR试剂盒说明书C8orf58 英文名称: 8号染色体开放阅读框58 0.2ml
Anti-CK7 细胞角蛋白7Multi-class antibodies规格: 0.2ml
AVP Human 人抗激素Multi-class antibodies规格: 48T
Anti-CITED1/ABCC1 结合转化激活因子CITED1Multi-class antibodies规格: 0.2ml
Rhesus antibody Rh NR1/NMDAR1 谷氨酸受体1 规格 0.1ml
Goat serum 封闭用正常山羊血清(原液) 5ml
THOC2 英文名称: 转录因子THOC2 0.2ml
CD38 英文名称: CD38 0.1ml
Anti-NeuroD1 神经元分化因子1Multi-class antibodies规格: 0.2ml
Mouse keratinocyte autocrine factor/Amphiregulin,KAF/AR ELISA Kit 小鼠角化细胞因子/双调蛋白Multi-class antibodies规格: 48T
Anti-BSP/FITC 荧光素标记骨涎蛋白IgGMulti-class antibodies规格: 0.2ml
Rhesus antibody Rh EpCAM/CD326 上皮特异性抗原 规格 0.1ml
D2D (Rabbit D-Dimer) ELISA Kit 兔子D二聚体 96T
phospho-p38 MAPK (Tyr323) 英文名称: 磷酸化p38MAPK 0.1ml
DAPL1 英文名称: 凋亡相关蛋白激酶样蛋白1 0.2ml
细胞死亡调解子 Anti-Bim 0.1ml
EFR3A 英文名称: EFR3A蛋白 0.2ml
Toll样受体2 Anti-TLR2 0.1ml
Anti-TNFAIP3 /FITC 荧光素标记兔抗人、大、小鼠坏死因子α诱导蛋白3IgGMulti-class antibodies规格: 0.2ml
Rhesus antibody Rh phospho-KCNC1(Ser503) 磷酸化离子通道蛋白Kv3.1 规格 0.1ml
PDGF-R-B 血小板源性生长因子受体-B(抗原)Multi-class antibodies规格: 0.5mg
CST9 英文名称: 胱抑素9/半胱酸蛋白酶抑制剂9 0.2ml
Anti-phospho-FAK (Ser732) 磷酸化粘着斑激酶Multi-class antibodies规格: 0.1ml
ADAMTS-7(a disintegrin-like and metalloprotease-7 ) 新型金属基质蛋白酶(抗原)Multi-class antibodies规格: 0.5mg
Anti-ICOS-L/B7-H2/CD275 诱导协同刺激分子配体CD275Multi-class antibodies规格: 0.1ml
Rhesus antibody Rh phospho-ADRB2 (Ser261) 磷酸化肾上腺素能受体β2 规格 0.1ml
Macrophage 巨噬细胞 浓缩液 0.1ml 进口分装
SLC22A11 英文名称: 尿酸盐重吸收转运子1 0.2ml