PCR反应鉴定——PCR反应条件:

客户只需提供样品和待检测名称即可。由我们提取RNA，设计并合成引物，完成荧光定量PCR实验以及后续数据分析，提供实验报告给您。

荧光定量PCR检测方法包括以下步骤：

(1)产品仅用于科研将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线；

(2)待测样本与步骤(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。

其中步骤(1)为：将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线。

其中所述参照基因为本领域常规参照基因，较佳地管家基因，优选地为RPPH1的扩增区域，其中所述质粒载体为本领域常规质粒载体，较佳地为PCR克隆载体，优选地为TA cloning载体，所述TA cloning载体较佳地为pMD18-T载体。其中所述标准品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例较佳地为1：1。由于标准品中待测目的基因与参照基因的比例为1:1，解决了目前相对标准曲线法应用中目的基因与参照基因的浓度比例关系难以控制的问题，提高HER2基因扩增检测的可靠性。步骤(2)为：待测样本与步(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。

其中所述待测目的基因为本领域常规待测目的基因，较佳地为或者疾病的特异性基因，更佳地为HER2基因的扩增区域，所述荧光定量PCR扩增为本领域常规荧光定量PCR扩增方法，所述荧光定量PCR扩增方法较佳地为多通道荧光定量PCR扩增，更佳地为双通道荧光定量PCR扩增。
PCR实验方法步骤：

方法

1：在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。     

10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix （2mM）             

4 μl     引物1（10pM）                 

2 μl     引物2（10pM）                 

2 μl     Taq酶 （2U/μl）               

1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  

1 μl      加ddH2O至 50 μl  

视PCR仪有无热盖，产品仅用于科研不加或添加石蜡油。

2：调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，在72℃ 保温7min。

3：结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。

4：PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μl进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。

以下列是公司正在热销的产品：

毕赤酵母用途: 高效发酵 植酸酶

硬柄小皮伞用途: 可食用；可能为草坪菌根真菌。

*蜜环菌用途: 食药用菌

孟氏假单胞菌拉丁属名: Pseudomonas mandelii

蜡样芽孢杆菌拉丁属名: Bacillus  cereus

禾谷镰孢拉丁属名: Fusarium graminearum

金耳用途: 属外生菌根菌

变异短波单胞菌拉丁属名: Brevundimonas variabilis

橄榄色盘多毛孢拉丁属名: Pestalotia olivacea

粪链球菌用途: 乳酸菌制剂，可用于饲料添加剂、青贮饲料等

羊肚菌用途: 食用、药用

黑曲霉拉丁属名: Aspergillus niger

台湾根霉拉丁属名: Rhizopus  formosensis

长双歧杆菌长亚种拉丁属名: Bifidobacterium longum subsp. longum

细孢毛霉拉丁属名: Mucor subtilissimus
大豆源性成分探针法荧光定量PCR试剂盒说明书大鼠可溶性相关凋亡诱导配体(sTRAIL)ELISA试剂盒英文名称：Rat soluble tumor necrosis factor-related apoptosis inducing ligand,sTRAIL ELISA Kit进口/原装

GLUT3(Glucose transporter 3) 葡萄糖转运蛋白3抗原Multi-class antibodies规格： 0.5mg

L1CAM CD171 / N-CAML1 / L1CAM 鼠单抗 (PE) Human

Rhesus antibody Rh Phospho-Cyclin B1(Ser133) 磷酸化周期素B1 规格 0.1ml

Western转膜液 1L 自产

Zic2 英文名称： 锌指蛋白Zic2 0.2ml

DAZ1 英文名称： 缺失基因1 0.2ml

CD4 英文名称： CD4 0.1ml

Anti-phospho-ERK1(Thr202/Thr204)+ERK2(Thr183/Tyr185) 磷酸化原活化蛋白激酶1/2Multi-class antibodies规格： 0.1ml

Anti- Alpha-IFN-b (humen) 抗大鼠α干扰素受体Multi-class antibodies规格： 48T

Anti-Dnmt3a DNA甲基转移酶-3αMulti-class antibodies规格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh NCoR1 核受体辅助抑制因子1 规格 0.1ml

Human Anti-Thrombin III ,AT- III ELISA Kit 人抗凝血酶Ⅲ 96T

SIRT1 英文名称： 沉默调节蛋白1 0.1ml

BTG4 英文名称： B细胞迁移基因4 0.2ml

Anti-phospho-STAT1 (Tyr701) 磷酸化信号转导与转录激活因子1Multi-class antibodies规格： 0.1ml

IL-32 ELISA Kit 大鼠白介素32Multi-class antibodies规格： 48T

Anti-phospho-Synapsin I (Ser9) 磷酸化神经突触素1Multi-class antibodies规格： 0.1ml

Rhesus antibody Rh Goat Anti-Guinea pig IgG/Alexa Fluor 488 Alexa Fluor 488标记的羊抗豚鼠IgG 规格 0.1ml

FSA(Human fetal sulfoslycoprotein antigen) ELISA Kit 人胚胎性硫糖蛋白抗原 96T

NCE2 英文名称： 泛素结合酶E2F 0.2ml

CTAG1B 英文名称： /抗原1B 0.2ml

Anti-Pectinesterase 果胶酶Multi-class antibodies规格： 1ml

St-Ag(Human Salmonella typhi antigen) ELISA Kit 人伤寒抗原Multi-class antibodies规格： 48T

Anti-phospho-IRS1(Tyr895) 磷酸化受体底物-1Multi-class antibodies规格： 0.1ml

Rhesus antibody Rh Leptin 瘦素 规格 0.1ml

F-TESTO(Human Free Testoterone) ELISA Kit 人游离睾酮 96T

PHF8 英文名称： 组蛋白赖酸去甲基化酶PHF8 0.2ml