PCR实验方法步骤：

方法

1：在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。     

10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix （2mM）             

4 μl     引物1（10pM）                 

2 μl     引物2（10pM）                 

2 μl     Taq酶 （2U/μl）               

1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  

1 μl      加ddH2O至 50 μl  

视PCR仪有无热盖，产品仅用于科研不加或添加石蜡油。

2：调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，在72℃ 保温7min。

3：结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。

4：PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μl进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。

PCR反应鉴定——PCR反应条件:

荧光定量PCR检测方法包括以下步骤：

(1)产品仅用于科研将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线；

(2)待测样本与步骤(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。

其中步骤(1)为：将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线。

其中所述参照基因为本领域常规参照基因，较佳地管家基因，优选地为RPPH1的扩增区域，其中所述质粒载体为本领域常规质粒载体，较佳地为PCR克隆载体，优选地为TA cloning载体，所述TA cloning载体较佳地为pMD18-T载体。其中所述标准品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例较佳地为1：1。由于标准品中待测目的基因与参照基因的比例为1:1，解决了目前相对标准曲线法应用中目的基因与参照基因的浓度比例关系难以控制的问题，提高HER2基因扩增检测的可靠性。步骤(2)为：待测样本与步(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。

其中所述待测目的基因为本领域常规待测目的基因，较佳地为或者疾病的特异性基因，更佳地为HER2基因的扩增区域，所述荧光定量PCR扩增为本领域常规荧光定量PCR扩增方法，所述荧光定量PCR扩增方法较佳地为多通道荧光定量PCR扩增，更佳地为双通道荧光定量PCR扩增。
客户只需提供样品和待检测名称即可。由我们提取RNA，设计并合成引物，完成荧光定量PCR实验以及后续数据分析，提供实验报告给您。
以下列是公司正在热销的产品：

大肠杆菌用途: 研究DNA损伤机制及其启动子活性。

真姬菇用途: 用于科研教学。

紫色链霉菌拉丁属名: Streptomyces violaceus

费希尔曲霉拉丁属名: Aspergillus fischeri

产气荚膜梭菌 毒素A型拉丁属名: perfringens Type A

芸薹生链格孢注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

皱褶青霉拉丁属名: Penicillium rugulosum

耐多抗诺卡氏菌拉丁属名: Nocardia polyresistens

长孢洛德酵母注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

卷枝毛霉卷枝变型拉丁属名: Mucor circinelloides f. circinelloides

安大略假丝酵母拉丁属名: Candida ontarioensis

泡盛曲霉拉丁属名: Aspergillus  awamori

阿尔通山碱线菌拉丁属名: Natrinema altunense

胶孢注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

食吡啶红球菌拉丁属名: Rhodococcus pyridinivorans
大鼠源性成分探针法荧光定量PCR试剂盒供应商Centaurin beta 2 英文名称： CENTB2蛋白 0.1ml

Anti-CSP 环子孢子蛋白(约氏)Multi-class antibodies规格： 1ml

FGF-6 human 人成纤维生长因子-6Multi-class antibodies规格： 48T

Anti-CNGA2 环核苷酸阳离子通道蛋白α2Multi-class antibodies规格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh NOX4/NADPH oxidase 4 NADPH氧化酶4 规格 0.1ml

human HMGB-1 ELISA Kit 人高迁移率族蛋白B1 ELISA Kit 96T

TMEM16A 英文名称： 跨膜蛋白16A/钙激活氯离子通道 0.1ml

CD40L 英文名称： CD40L 0.1ml

Anti-Phospho-NPM (Ser4) 磷酸化核仁磷酸蛋白Multi-class antibodies规格： 0.1ml

ADAMTS4(Human ADAM metallopeptidase with thrombospondin type 1 motif4) ELISA Kit 人ADAM金属肽酶含血小板反应蛋白1基元4Multi-class antibodies规格： 48T

Anti-phospho-PAK1/2/3(Thr423) 磷酸化p21激活激酶1/2/3Multi-class antibodies规格： 0.1ml

Rhesus antibody Rh HOXD10 同源盒蛋白HOXD10 规格 0.2ml

AGA(Human anti-gliadin antibody) ELISA Kit 人抗麦胶蛋白/麦醇溶蛋白 96T

phospho-PI3 kinase p85 alpha + gamma (Tyr467 + Tyr199) 英文名称： 磷酸化磷脂酰肌醇激酶 0.1ml

CHMP5 英文名称： 染色质修饰蛋白CHMP5 0.1ml

Anti-Phospho-Connexin 43 (Ser368) 磷酸化Connexin 43蛋白Multi-class antibodies规格： 0.1ml

6His-Tag 6个组氨酸Multi-class antibodies规格： 48T

Anti-CK8 细胞角蛋白8Multi-class antibodies规格： 0.1ml

Rhesus antibody Rh NR2D/NMDAR2D 谷氨酸受体2D 规格 0.1ml

Tris 三羟甲基基甲烷 100g

TIAF1 英文名称： TGFB1诱导抗凋亡因子1 0.2ml

CTAG2 英文名称： /抗原2 0.2ml

Anti-L-enk 亮氨酸脑啡肽Multi-class antibodies规格： 0.2ml

16- Alpha OHE-1(Human 16- AlphaHydroxyestrogen 1) ELISA Kit 人16α羟基雌酮1Multi-class antibodies规格： 48T

Anti-Lgr5/GPR49 Lgr5/GPR49Multi-class antibodies规格： 0.1ml

Rhesus antibody Rh KLK9 激肽释放酶9(舒素9) 规格 0.1ml

iso-Hyd(Human Isoprenaline Hydrochloride) ELISA Kit 人异丙 96T

Phospho-p90RSK (Thr359 + Ser363) 英文名称： 磷酸化丝酸/苏酸激酶p90RSK蛋白 0.1ml