PCR实验方法步骤：

方法

1：在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。     

10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix （2mM）             

4 μl     引物1（10pM）                 

2 μl     引物2（10pM）                 

2 μl     Taq酶 （2U/μl）               

1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  

1 μl      加ddH2O至 50 μl  

视PCR仪有无热盖，产品仅用于科研不加或添加石蜡油。

2：调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，在72℃ 保温7min。

3：结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。

4：PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μl进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。

PCR反应鉴定——PCR反应条件:

荧光定量PCR检测方法包括以下步骤：

(1)产品仅用于科研将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线；

(2)待测样本与步骤(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。

其中步骤(1)为：将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线。

其中所述参照基因为本领域常规参照基因，较佳地管家基因，优选地为RPPH1的扩增区域，其中所述质粒载体为本领域常规质粒载体，较佳地为PCR克隆载体，优选地为TA cloning载体，所述TA cloning载体较佳地为pMD18-T载体。其中所述标准品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例较佳地为1：1。由于标准品中待测目的基因与参照基因的比例为1:1，解决了目前相对标准曲线法应用中目的基因与参照基因的浓度比例关系难以控制的问题，提高HER2基因扩增检测的可靠性。步骤(2)为：待测样本与步(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。

其中所述待测目的基因为本领域常规待测目的基因，较佳地为或者疾病的特异性基因，更佳地为HER2基因的扩增区域，所述荧光定量PCR扩增为本领域常规荧光定量PCR扩增方法，所述荧光定量PCR扩增方法较佳地为多通道荧光定量PCR扩增，更佳地为双通道荧光定量PCR扩增。
客户只需提供样品和待检测名称即可。由我们提取RNA，设计并合成引物，完成荧光定量PCR实验以及后续数据分析，提供实验报告给您。
以下列是公司正在热销的产品：

肺形侧耳注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

泡盛曲霉拉丁属名: Aspergillus awamori

大肠埃希氏菌拉丁属名: Escherichia  coli

粪纤维单胞菌拉丁属名: Cellulomonas  fimi

枯草芽孢杆菌拉丁属名: Bacillus  subtilis

短乳杆菌拉丁属名: Lactobacillus  brevis

红球菌拉丁属名: Rhodococcus  qingshengii

生癌肠杆菌拉丁属名: Enterobacter cancerogenus

炭角菌*拉丁属名: Xylaria sp.

乳明串珠菌拉丁属名: Leuconostoc lactis

偏肿栓孔菌拉丁属名: Trametes gibbosa

细链格孢注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

米根霉拉丁属名: Rhizopus oryzae

毒害艾美耳球虫拉丁属名: necatrix

粉红聚端孢注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用
小麦源性成分探针法荧光定量PCR试剂盒 EPOR Kit Human 人 EPOR ELISA配对 ELISA

TTC21B 英文名称： 四聚体多肽蛋白21B 0.2ml

CD24 英文名称： CD24 0.1ml

Anti-CD25/IL-2RA 白介素2受体a链Multi-class antibodies规格： 0.1ml

兔淋巴细胞功能相关抗原3(LFA-3/CD58)ELISA试剂盒英文名称：Rabbit lymphocyte function associated antigen 3,LFA-3 ELISA Kit 进口/原装

兔内皮型一氧化氮合成酶(eNOS)ELISA试剂盒 英文名称：Rabbit Endothelial nitric oxide synthase,eNOS ELISA Kit 进口/原装

兔尿激酶型纤溶酶原激活物(uPA)ELISA试剂盒英文名称：Rabbit urokinase plasminogen activator,uPA ELISA Kit 特价供应

Cdc14A 英文名称： 细胞周期调控因子14A 0.1ml

Anti-PAR4 蛋白酶活化受体4Multi-class antibodies规格： 0.1ml

RANA(Human rheumatoid arthritis associated nuclear artigen) ELISA Kit 人抗核抗原Multi-class antibodies规格： 48T

Anti-P21/CDKN1A p21蛋白Multi-class antibodies规格： 0.1ml

Rhesus antibody Rh Hyaluronidase2 透明质酸酶2/玻璃酸酶2 规格 0.2ml

NSE ELISA Kit 大鼠神经特异性烯醇化酶 96T

PI3 Kinase p110 beta 英文名称： 磷脂酰肌醇激酶(PI3Kβ) 0.1ml

人肽-主要组织相容性复合体复合物(pMHC)ELISA试剂盒英文名称：Human peptide major histocompatibility complex,pMHC ELISA Kit进口/分装

Peptide YY 酪酪肽多肽(1-36)Multi-class antibodies规格： 0.5mg

Anti-Bassoon 锌指蛋白231Multi-class antibodies规格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh Phospho-5-Lipoxygenase(Ser271) 磷酸化5-脂氧合酶 规格 0.1ml

Keratin17 浓缩液 0.1ml 进口分装

UBE2V1 英文名称： 泛素结合酶E2变异体1 0.2ml

CHSS2 英文名称： 软骨素酶2 0.1ml

CXXC5 英文名称： 二硫键氧化还原酶锌指蛋白5 0.2ml

Anti-PKC alpha 蛋白激酶C αMulti-class antibodies规格： 0.2ml

VA(Human Vitamin A) ELISA Kit 人维生素AMulti-class antibodies规格： 48T

Anti-Phospho-PLK1 (Ser137) 磷酸化丝/苏氨酸蛋白激酶Plk1Multi-class antibodies规格： 0.1ml

Rhesus antibody Rh HER3/ErbB3 HER3受体 规格 0.2ml

ACA-IgM(Mouse anti-cardiolipin antibody IgM) ELISA Kit 小鼠抗心磷脂IgM 96T

PPP2R2B/PP2A-B55 英文名称： 蛋白质磷酸酶2A-B55 0.2ml