客户只需提供样品和待检测名称即可。由我们提取RNA,设计并合成引物,完成荧光定量PCR实验以及后续数据分析,提供实验报告给您。
产品名称 | 规格 | 货号 |
芝麻源性成分探针法荧光定量PCR试剂盒说明书 | 50T | LZR4335 |
PCR实验方法步骤:
方法
1:在冰浴中,按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
10×PCR buffer
5 μl dNTP mix (2mM)
4 μl 引物1(10pM)
2 μl 引物2(10pM)
2 μl Taq酶 (2U/μl)
1 μl DNA模板(50ng-1μg/μl)
1 μl 加ddH2O至 50 μl
视PCR仪有无热盖,产品仅用于科研不加或添加石蜡油。
2:调整好反应程序。将上述混合液稍加离心,立即置PCR仪上,执行扩增。一般:在93℃预变性3-5min,进入循环扩增阶段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循环30-35次,在72℃ 保温7min。
3:结束反应,PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4:PCR的电泳检测:如在反应管中加有石蜡油,需用100μl进行抽提反应混合液,以除去石蜡油;否则,直接取5-10μl电泳检测。
PCR反应鉴定——PCR反应条件:
循环步骤 | 温度 | 时间 | 循环数 |
预变性 | 94℃ | 5 min | 1 |
变性 | 94℃ | 10 sec | 30-40 |
退火 | 50-65℃ | 20 sec | 30-40 |
延伸 | 72℃ | 30 sec/kb | 30-40 |
终延伸 | 72℃ | 5 min | 1 |
荧光定量PCR检测方法包括以下步骤:
(1)产品仅用于科研将参照基因与待测目的基因片段等比例连接,克隆到同一个质粒载体上,构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品,并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线;
(2)待测样本与步骤(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后,目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数,计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值,即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。
其中步骤(1)为:将参照基因与待测目的基因片段等比例连接,克隆到同一个质粒载体上,构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品,并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线。
其中所述参照基因为本领域常规参照基因,较佳地管家基因,优选地为RPPH1的扩增区域,其中所述质粒载体为本领域常规质粒载体,较佳地为PCR克隆载体,优选地为TA cloning载体,所述TA cloning载体较佳地为pMD18-T载体。其中所述标准品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例较佳地为1:1。由于标准品中待测目的基因与参照基因的比例为1:1,解决了目前相对标准曲线法应用中目的基因与参照基因的浓度比例关系难以控制的问题,提高HER2基因扩增检测的可靠性。步骤(2)为:待测样本与步(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后,目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数,计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值,即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。
其中所述待测目的基因为本领域常规待测目的基因,较佳地为或者疾病的特异性基因,更佳地为HER2基因的扩增区域,所述荧光定量PCR扩增为本领域常规荧光定量PCR扩增方法,所述荧光定量PCR扩增方法较佳地为多通道荧光定量PCR扩增,更佳地为双通道荧光定量PCR扩增。
以下列是公司正在热销的产品:
球型芽孢杆菌拉丁属名: Bacillus sphaericus Meyer et Neide
毛栓孔菌拉丁属名: Trametes hirsuta
酱油 氨基酸态氮、氯化钠、三氯蔗糖拉丁属名: 酱油 氨基酸态氮、氯化钠、三氯蔗糖
纺锤雷素链霉菌拉丁属名: Streptomyces netropsis
异常汉逊酵母拉丁属名: Hansenula anomala
大豆慢生根瘤菌用途: 与大豆共生固氮
黑曲霉拉丁属名: Aspergillus niger
米根霉拉丁属名: Rhizopus oryzae
苏云金芽孢杆菌用途: 害虫生物防治
蜡样芽孢杆菌拉丁属名: Bacillus cereus
枯草芽胞杆菌注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的,不可用于人类或动物的临床诊断或,非药用,非食用
枯草芽孢杆菌拉丁属名: Bacillus subtilis
胶红酵母拉丁属名: Rhodotorula mucilaginosa
根瘤菌用途: 固氮
黄硬皮马勃用途: 外生菌根菌
芝麻源性成分探针法荧光定量PCR试剂盒说明书A2BP1 英文名称: 蛋白2结合蛋白1 0.2ml
Anti-CD229/SLAMF3/FITC 荧光素标记CD229IgGMulti-class antibodies规格: 0.2ml
HBeAb(Mouse hepatitis B virus e antibody) ELISA Kit 小鼠eMulti-class antibodies规格: 48T
Anti-Caspase-13/FITC 荧光素标记半胱胺酸蛋白酶蛋白-13IgGMulti-class antibodies规格: 0.2ml
Rhesus antibody Rh ELAVL1/HuR ELAVL1 规格 0.2ml
I CTP ELISA Kit 小鼠Ⅰ型胶原交联羧基末端肽 96T
MTLR 英文名称: 胃动素受体 0.1ml
CDC42EP3 英文名称: CDC42效应蛋白3 0.1ml
Anti-Phospho-Mst1 (Thr183)/Mst2 (Thr180) 磷酸化蛋白激酶MSTMulti-class antibodies规格: 0.1ml
T(Human Testoterone) ELISA Kit 人睾酮Multi-class antibodies规格: 48T
Anti-LTB4-R1 白三烯B4受体1Multi-class antibodies规格: 0.1ml
Rhesus antibody Rh Kiss 1/Kisspeptin 转移抑制基因 规格 0.1ml
FT4 ELISA Kit 大鼠游离甲状腺素 96T
PCGF1 英文名称: 表观抑制因子Polycomb家族成员PCGFl蛋白 0.2ml
小鼠Qa淋巴细胞抗原2(Qa-2)ELISA试剂盒 英文名称:Mouse Qa lymphocyte antigen 2 region,Qa-2 ELISA Kit进口/分装
小鼠S100蛋白(S-100)ELISA试剂盒英文名称:Mouse Soluble protein-100,S-100 ELISA Kit特价供应
小鼠Slit2 ELISA试剂盒 英文名称:Mouse Slit2 ELISA Kit 进口/分装
小鼠Toll样受体9(TLR-9/CD289)ELISA试剂盒 英文名称:Mouse Toll-like receptor 9,TLR-9 ELISA Kit 进口/分装
TFF3 (trefoil factor3) 三叶肽因子3(多肽)Multi-class antibodies规格: 0.5mg
Anti-BSEP 胆汁酸盐输出泵蛋白Multi-class antibodies规格: 0.2ml
Rhesus antibody Rh PDZD8 PDZ结构域PDZK8蛋白 规格 0.2ml
Cyclin G2 英文名称: 周期素G2 0.1ml
Anti-CHK2 细胞周期检测点激酶2Multi-class antibodies规格: 0.2ml
STBM human 合体滋养细胞微绒毛膜Multi-class antibodies规格: 48T
Anti-CYP2C9 细胞色素P450 2C9Multi-class antibodies规格: 0.2ml
Rhesus antibody Rh NFAT1/NFATc2 核因子活化T细胞胞浆蛋白2 规格 0.1ml
Human small breast epithelial mucin,SBEM ELISA Kit 人小表皮粘蛋白 96T
phospho-TIRAP(Tyr86) 英文名称: 磷酸化白细胞介素1受体衔接蛋白 0.1ml