产品展厅
产品展厅
产品特点：
◇高特异性：与其他病毒无交叉反应，无非特异性扩增；
◇高灵敏度：检测灵敏度可达10~100拷贝；
◇操作简便：该系列所有试剂均采用相同的体系和条件，可同时进行多个检测；
◇高通量：多种双重PCR检测以及三重PCR检测试剂盒。
参数规格：
产品名称：转基因构建FMV启动子-PVY基因探针法qPCR试剂盒规格
货号：LZR86148
产品规格：50次
产品运输：低温运输
产品保存：-20℃保存
产品有效期：一年
产品特点：
产品仅用于科研本产品就是根据保守区设计引物而开发的高灵敏 PCR检测试剂盒 。
需要注意：
PCR反应液请在冰中配制，然后置于PCR反应仪上进行PCR反应。这种冷启动法（Cool Start Method）与热启动法（Hot Start Method）相结合，更能有效地减少PCR过程中的非特异性反应，增强PCR扩增的特异性，能得到良好的PCR结果。
PCR的反应条件：
因扩增片段的大小、反应体积、使用扩增仪器的不同而不同。
◇ 循环次数
根据模板DNA的量以及扩增片段的大小，设定25～30个循环。
如果循环次数太少，扩增量不足；如果循环次数太多，则会出现Smear。
◇ Anneal以及Extension
合适的Anneal温度通常在45～68℃之间 (预备实验可2℃间隔进行)。另外，由于在60～68℃间，也有很高的活性, 因此可在此温度范围内设定Anneal-Extension温度, 进行2 Step PCR。Anneal-Extension温度为68℃ 时，每kbp大体可设定30秒～1分钟；当温度设定在68℃以下时, 时间设定可稍长一些。通常，Anneal温度太高，有时会得不到扩增产物；Anneal温度太低时，容易发生非特异性反应。另外，Extension时间太短时，会得不到扩增产物或者会有一些短的非特异性产物优成；而Extension时间太长时，会出现Smear。
使用方法
一、样品 DNA 的制备
1.用自选方法纯化样品的 DNA，本试剂盒跟市场上大多数病毒 DNA 提取试剂盒兼容。也可以选购本公司的一管式病毒 DNAout 或其升级版柱式病毒DNAout。
2.如果有 N 个样品，则需要做 N+2 个提取，包括一个阳性对照和一个阴性对照。阳性对照是在 200μL 水中加 10μL PCR 阳性对照作为阳性对照，阴性对照是直接用 200μL 水作为阴性对照。提取结束后，*得到 200μL 模板 DNA（每个样品）放冰上待用，溶解 DNA 沉淀的溶液不能少于 200μL，否则PCR 抑制物很可能会抑制 PCR。二、PCR（60 μL 体系）
3.样品管：在 N+2 个PCR 管中加入下列成分：成分 N 个样品管 阴性对照 阳性对照PCR MagicMix 3.0 各 20 μL 20 μL 20 μL PCR 引物对 各 2 μL 2 μL 2 μL 样品 DNA 模板 各 18 μL - - 阳性对照（纯化后） - 18 μL - 阴性对照（纯化后） - - 18 μL电泳检测
4.取 10-20 μL PCR 产物直接进行琼脂糖凝胶电泳（本产品不需要单独加loading buffer），使用 100 bp DNA Marker，如果样品为阳性，将会得到长度为 3582 bp 的扩增产物。
二反应的准备：
待各组份融化后先瞬时离心，然后轻弹混匀。按下表在已灭菌的PCR管中配制反应体系，每次实验需加一个阴性和一个阳性对照，测试反应管可以有多个。配制过程中应注意无菌，戴口罩，并注意避免操作产生的气溶胶造成样品间的交叉污染，推荐在有风压的设备如超净台或生物安全柜中进行操作。建议配制完毕后瞬时离心以使液体沉至管底。
三、PCR反应：
降落PCR法(Touchdown PCR)：94℃变性2分钟;首循环：94℃变性30秒，68℃退火30秒，72℃延伸45秒;八个循环开始，每循环退火温度下降1℃，其余不变;从第九个循环开始，反应条件固定为：94℃变性30秒，60℃退火30秒，72℃延伸45秒，循环32次;循环结束后，在72℃延伸7分钟，*保持在4℃。
标准操作步骤：
产品仅用于科研如非指出，所有离心步骤均为使用台式离心机在室温下离心。
1.液氮充分研磨样品。
2.收集研磨成粉末的50mg样品，置于1.5ml离心管中。
3.加入350μl65℃预热的缓冲液IL，并加入20μl蛋白酶K剧烈地漩涡振荡，确保所有的组织团都分散均匀。
4.65℃水浴20-30min。水浴期间颠倒样品数次。
5.加入350μl氯仿，充分混匀，12,000 rpm(~13,400×g)离心5分钟。
6.小心地把上清液吸至另一新的1.5ml离心管中。注意确保不要打散沉淀团或把组织碎片也一起转移。
7.加入4μl RNase A，涡旋混匀。室温放置2min。
8.加入二分之一上清体积的缓冲液IB与等体积的无水乙醇，充分混匀。如：向300μl上清中加入150μl缓冲液IB与300μl无水乙醇。
9.把上述混匀的液体转移到吸附柱上。10,000×g离心1 min以结合DNA，弃去滤出液体。纯化柱*容量为750μl,如果混合液大于750μl,请分两次过柱。
10.将吸附柱重新套回收集管中，加入500μl缓冲液WB至柱子中，10,000×g离心1min,倒弃流出液；
11.将吸附柱重新套回收集管中，加入600μl DNA Wash Buffer至柱子中，10,000×g离心1min,倒弃流出液；
注意：DNA Wash Buffer使用前须按要求用无水乙醇稀释。如果放入冰箱中，使用前须恢复到室温。
12.再加入600μl DNA Wash Buffer至柱子中，8,000×g离心1min,弃去流出液；
13.将吸附柱重新套回2ml收集管中，转速（>13000×g）离心空结合柱1min以干燥柱子的基质；这一步对下面的洗脱步骤至关重要。
14.将柱子置于1.5ml灭菌离心管，加入50-150μl65℃预热的洗脱缓冲液EB至柱子的膜中央。室温静置5min；
15. 室温下，离心(>13000)1min，以洗脱DNA。保留含DNA的流出液。将DNA储于-20℃。
8偶鸟嘌呤 含量：≥ 98% 规格：5 mg/支
8Azaguanine 含量：≥ 98% 规格：5 mg/支
8羟喹啉 含量：≥ 98% 规格：20 mg/支
8Hydroxyquinoline 含量：≥ 98% 规格：20 mg/支
脱落 含量：暂不提供 规格：1ml，3ml
Abscisic Acid 含量：暂不提供 规格：1ml，3ml
2,2’连双(3并二噻唑啉6)二铵盐 含量：暂不提供 规格：1ml，3ml
ABTS, Diammonium Salt 含量：暂不提供 规格：50次，200次
洋川芎内I;Senkyunolide CAS号： 94596288 规格： 50mg 订购|咨询
洋川芎内H;Senkyunolide CAS号： 94596277 规格： 50mg 订购|咨询
洋川芎内A;Senkyunolide CAS号： 62006397 规格： 50mg 订购|咨询
8O酰山栀苷;8Oacet CAS号： 57420469 规格： 20mg 订购|咨询
鸭脚树叶碱;2α,5αEpoxy1, CAS号： 4684326 规格： 20mg 订购|咨询
异鼠李素3O葡萄糖苷;Isorha CAS号： 5041827 规格： 10mg 订购|咨询
原花青素B2;Procyanidin B CAS号： 29106498 规格： 20mg 订购|咨询
原花青素B1;Procyanidin B CAS号： 20315257 规格： 20mg 订购|咨询
酰紫堇灵;Acetylcorynoli CAS号： 18797803 规格： 20mg 订购|咨询
异槲皮苷;Isoquercitrin CAS号： 21637252 规格： 20mg 订购|咨询
异鼠李素3O新橙皮苷;Isorha CAS号： 55033904 规格： 20mg 订购|咨询
原苏木素B;Protosappanin CAS号： 102036293 规格： 20mg 订购|咨询
异麦角甾苷;Isoacteoside CAS号： 61303137 规格： 20mg 订购|咨询
鸢尾黄素;Tectorigenin CAS号： 548776 规格： 20mg 订购|咨询
芸香柚皮苷;Narirutin CAS号： 14259462 规格： 20mg 订购|咨询
Aminoguanidine hemisulfate salt,≥98%大鼠补体片断3a(C3a) 进口/国产
Nitroguanidine,98%兔子补体片断3a(C3a) 进口/国产
Guanidine Phosphate,98%人补体片断*(C*) 进口/国产
1-Methyl-3-nitro-1-nitrosoguanidine,97%小鼠补体片断*(C*) 进口/国产
Guanidine carbonate,99%大鼠补体片断*(C*) 进口/国产
Guanidine nitrate,98%人过敏毒素/补体片断4(C4a) 进口/国产
Guanidine sulfate,99%小鼠过敏毒素/补体片断4a(C4a) 进口/国产
3-Amino-5-cyclopropyl-1H-pyrazole,99%大鼠过敏毒素/补体片断4a(C4a) 进口/国产
转基因构建FMV启动子-PVY基因探针法qPCR试剂盒规格Derxomyces│schimicola提供形式: 冻干物安全等级: 1模式菌株: yes应用领域: 模式菌株培养基: 0013生长条件: 17℃存储条件: 液氮超低温冻结法;真空冷冻干燥法
酿酒酵母种属: Saccharomyces│cerevisiae提供形式: 冻干物安全等级: 1模式菌株: no应用领域: 葡萄酒。培养基: CM0077生长条件: 28℃存储条件: 真空冷冻干燥法；定期移植法
Azotobacter│sp.分离基物: 土壤提供形式: 斜面培养物安全等级: 1模式菌株: no应用领域: 固氮培养基: 3生长条件: 28-30存储条件: 定期移植法
尿酸氧化节杆菌种属: Arthrobacter│uratoxydans提供形式: 冻干物安全等级: 1模式菌株: no培养基: CM0002生长条件: 30℃存储条件: -80℃冰箱冻结法；真空冷冻干燥法
Beauveria│bassiana提供形式: 斜面培养物安全等级: 1模式菌株: no培养基: 0436生长条件: 28℃
Brevibacterium│flavum提供形式: 冻干物安全等级: 1模式菌株: no应用领域: L-亮氨酸培养基: CM0048生长条件: 28-31℃存储条件: 真空冷冻干燥法；定期移植法
西藏盐红菌种属: Halorubrum│tibetense分离基物: 土壤提供形式: 冻干物安全等级: 1模式菌株: no培养基: 0212生长条件: 37℃存储条件: 液氮超低温冻结法;真空冷冻干燥法
Alternaria│sp.提供形式: 斜面培养物安全等级: 1模式菌株: no应用领域: 活性培养基: CM0014生长条件: 28C存储条件: 真空冷冻干燥
蜡状芽孢杆菌种属: Bacillus│cereus分离基物: 牛奶提供形式: 冻干物安全等级: 2模式菌株: no培养基: 0002生长条件: 30℃存储条件: 液氮超低温冻结法;真空冷冻干燥法
