免疫荧光技术的实验步骤:
一、准备好试剂与仪器:
磷酸盐缓冲盐水、荧光标记的抗体溶液、缓冲甘油、搪瓷桶三只、有盖搪瓷盒一只、荧光显微镜、玻片架、滤纸、37℃温箱等。
二、实验步骤
1.滴加0.01mol/L,pH7.4的PBS于待检标本片上,十分钟后弃去,使标本保持一定湿度。
2.滴加适当稀释的荧光标记的抗体溶液,使其完全覆盖标本,置于有盖搪瓷盒内,保温一定时间以三十分钟为参考。
3.取出玻片,置玻片架上,先用0.01mol/L,pH7.4的PBS冲洗后,再按顺序过0.01mol/L,pH7.4的PBS三缸浸泡,每缸三到五分钟,并不停地摇晃振荡。
4.取出玻片,用滤纸吸去多余水分,但不使标本干燥,加一滴缓冲甘油,以盖玻片覆盖。
5.立即用荧光显微镜观察。观察标本的特异性荧光强度。
别 名 CCD56_HUMAN; CCDC56; Coiled-coil domain-containing protein 56; HSPC009.
纯化方法 affinity purified by Protein A
储 存 液 Preservative: 15mM Soium zde, Constituents: 1% BSA, 0.01M PBS, pH 7.4
产品应用 WB=1:100-500 ELISA=1:500-1000 IP=1:20-100 IHC-P=1:100-500 IHC-F=1:100-500 IF=1:100-500
产品名称 | 卷曲螺旋结构域蛋白56抗体0.2ml/200μg |
英文名称 | Anti-CCDC56 |
货号 | LZK63287 |
英文名称 Anti-CCDC56
中文名称 卷曲螺旋结构域蛋白56抗体
浓 度 1mg/1ml
规 格 0.2ml/200μg
抗体来源 Rabbit
克隆类型 polyclonal
交叉反应 Human, Mouse, Rat, Dog, Pig, Cow, Horse, Rabbit, Sheep
产品类型 一抗
研究领域 细胞生物 免疫学
蛋白分子量 predicted molecular weight: 12kDa
性 状 Lyophilized or Liquid
免 疫 原 KLH conjugated synthetic peptide derived from Human CCDC56
亚 型 IgG
抗体的制备过程:
1. 免疫原:普通的大分子蛋白,通过分子克隆构建载体并在大肠杆菌中进行诱导表达获得重组蛋白,纯化鉴定后可直接作为免疫原;小分子蛋白或化合物等分子量小,需要偶联载体对该分子进行改造才能使其成为具有免疫原性的抗原,常见偶联载体如BSA、OVA、HAS等。
2. 免疫动物:常用于制备抗血清的动物有豚鼠、家兔、鸡、大小鼠等,大量 时需要用到狗、绵羊、山羊等。
3. 免疫血清的收集:一般家兔、绵羊、山羊可采用静动脉采血,家兔、豚鼠、大鼠、鸡可采用采血,家兔、山羊、绵羊可采用采血。
4. 免疫血清的纯化与鉴定:得到的抗血清需要进一步的纯化,利用偶联了抗原的亲和柱进行层析,具有高效,特异性强,纯度高的特定。接着要鉴定纯化蛋白的含量、相对分子的质量、纯度以及特异性。
5. 免疫血清的保存:抗体一般比较稳定,在-80℃ ~-20 ℃可以保存约5年而不会影响效价,而真空干燥保存时间可以更久。联祖保存前需经除菌并添加防腐剂。
抗体分子标记技术:
(一)原理
当应用化学氧化法时(NaI)遇强氧化剂,离子被氧化为分子,所生成的自由分子可与某些基团进行卤化反应。蛋白质分子可进行卤化反应的基团主要为酪氨酸残基,某些组氨酸残基也可能进行化。在应用胺T( Chloramine T)法的实验中,所用的氧化剂(1,3,4,6- tetrachloro-3a,6adipheny l-glucoluril)强挥发性的有机溶剂中。该溶剂加入试管后,先让其挥发(即让氧化剂将试管包被),然后把Na125I和蛋白质液加入包被好的试管中,反应完成即将混合液移入他管终止反应。
(二)准备
1.试剂
经亲和层析纯化的多克隆抗体或单克隆抗体;0.5mol/L磷酸钠缓冲液,pH7.5;无载体的Na125I3.7GBq/ml(100mCi/ml)的NaOH液;100g/L三醋酸;70%乙醇;新鲜制备的含2mg/m1络胺T的0.5mol/L磷酸钠缓冲液(pH7.5);胺T反应终止缓冲液;
2.仪器
凝胶过滤柱;¥-记数器;玻璃纤维滤。
(三)操作要点
1.用胺T法进行化,也可在大约pH7.0的缓冲液中进行;
2.如果氧化反应损伤蛋白质,可将抗体与异硫氰酸荧光素(FITC)偶联)胺T量减少到0.02mg/m,并将偏重亚硫酸液的浓度降到0.024mg/ml;
3. Iodogen-包被的试管可在干燥器中,于室温下保存多年;
4.1251标记的抗体,在制备后六周内均可使用(1251的半衰期为59.6天);
5.要注意保证所用的Na1251是新鲜的,陈旧制剂的比活性低;
6.酪氨酸的碘化偶尔会对抗原的抗体结合位点有干扰,因此降低其结合能力,但这种情况很少见。
L赖氨醋盐标准品 定做种属检测试剂盒/中药材鉴定试剂盒 低温 规格:200mg 英文名称:LLysine Acetate
丹曲林相关物质B标准品 定做种属检测试剂盒/中药材鉴定试剂盒 低温 规格:50mg 英文名称:
雌二相关物质C标准品 定做种属检测试剂盒/中药材鉴定试剂盒 低温 规格:15mg 英文名称:
马尿乌标准品 定做种属检测试剂盒/中药材鉴定试剂盒 低温 规格:200mg 英文名称:Methenamine Hippurate
马来醋奋乃静标准品 定做种属检测试剂盒/中药材鉴定试剂盒 低温 规格:200mg 英文名称:Acetophenazine Maleate
尿标准品 定做种属检测试剂盒/中药材鉴定试剂盒 低温 规格:200mg 英文名称:Urea
革标准品 定做种属检测试剂盒/中药材鉴定试剂盒 低温 规格:125mg 英文名称:Clorazepate Dipotassium CIV
西曲铵标准品 定做种属检测试剂盒/中药材鉴定试剂盒 低温 规格:1g 英文名称:Cetrimonium Bromide
法相关物质A标准品 定做种属检测试剂盒/中药材鉴定试剂盒 低温 规格:25mg 英文名称:Nefazodone Related Compound A
地标准品 定做种属检测试剂盒/中药材鉴定试剂盒 低温 规格:0.5ml 英文名称:Desflurane
N丁 进口、国产 英文名称:Butyricanhydride 含量:AR
N二甲氨基琥珀酰 进口、国产 英文名称:B9 含量:USP级,98.5%
N二乙基亚 进口、国产 英文名称:NNitrosodiethylamine 含量:BR,98%
N甘氨酰甘氨 进口、国产 英文名称:Glycylglycine 含量:BR,98%
N癸基βD吡喃葡萄糖苷 进口、国产 英文名称:DecylβDglucopyranoside 含量:优质级
N癸酰基N甲基葡糖 进口、国产 英文名称:MEGA10 含量:优质级
N甲基氨基乙甲酯盐盐 进口、国产 英文名称:SarcosinemethylesterHC1 含量:BR,99%
N甲基氨基乙 进口、国产 英文名称:sodiumSarcosine 含量:BR,98%
N甲基氨基乙乙酯盐盐 进口、国产 英文名称:SarcosineethylesterHC1 含量:BR,99%
N甲基甘氨 进口、国产 英文名称:Sarcosine 含量:BR,99%
卷曲螺旋结构域蛋白56抗体0.2ml/200μg人脑源性神经营养因子(BDNF)ELISA试剂盒Radix et caulis acanthopanacis senticosi刺五加染料法PCR鉴定试剂盒 定做种属检测试剂盒/中药材鉴定试剂盒 50次 低温 负20度 一年2-4周
人白细胞活化黏附因子(ALCAM)ELISA试剂盒Pericarpium arecae大腹皮染料法PCR鉴定试剂盒 定做种属检测试剂盒/中药材鉴定试剂盒 50次 低温 负20度 一年2-4周
人白细胞活化黏附因子(ALCAM)ELISA试剂盒Radix et rhizoma rhei大黄染料法PCR鉴定试剂盒 定做种属检测试剂盒/中药材鉴定试剂盒 50次 低温 负20度 一年2-4周
人活化素A(ACV-A)ELISA试剂盒Herba cirsii japonici大蓟染料法PCR鉴定试剂盒 定做种属检测试剂盒/中药材鉴定试剂盒 50次 低温 负20度 一年2-4周
人活化素A(ACV-A)ELISA试剂盒Folium isatidis 大青叶染料法PCR鉴定试剂盒 定做种属检测试剂盒/中药材鉴定试剂盒 50次 低温 负20度 一年2-4周
L-异白氨酸 进口、国产 英文名称:L-Isoleucine 含量:BR,99%
L-异亮氨酸甲酯盐酸盐 进口、国产 英文名称:H-Ile-OMe.HCl 含量:特纯,98.0%
L-异木糖 进口、国产 英文名称:L-(+)-Lyxose 含量:专业级,70%
L-正白氨酸 进口、国产 英文名称:L-Norleucine 含量:BR,99%
L-组氨酸甲酯二氫氯化物 进口、国产 英文名称:L-Histidinemethylesterdihydrochloride 含量:BR,98%
MAYER氏粘液素卡红 进口、国产 英文名称:Mucicarmine 含量:高纯,96%
MMLV逆转录酶 进口、国产 英文名称:M-MLVReversetranscriptase 含量:USP级,1000u/mg
N-(1-甲基乙基)-2-丙烯酰胺 进口、国产 英文名称:NIPAM 含量:CP,20-40目
N-(2-乙酰氨基)-亚氨基二醋酸 进口、国产 英文名称:ADA 含量:络合指示剂
N-(2-乙酰胺基)亚氨基二乙酸二钠盐 进口、国产 英文名称:ADA-2Na 含量:AR,99%