免疫荧光技术的实验步骤：

一、准备好试剂与仪器：

磷酸盐缓冲盐水、荧光标记的抗体溶液、缓冲甘油、搪瓷桶三只、有盖搪瓷盒一只、荧光显微镜、玻片架、滤纸、37℃温箱等。

二、实验步骤

1.滴加0.01mol/L，pH7.4的PBS于待检标本片上，十分钟后弃去，使标本保持一定湿度。

2.滴加适当稀释的荧光标记的抗体溶液，使其完全覆盖标本，置于有盖搪瓷盒内，保温一定时间以三十分钟为参考。

3.取出玻片，置玻片架上，先用0.01mol/L，pH7.4的PBS冲洗后，再按顺序过0.01mol/L，pH7.4的PBS三缸浸泡，每缸三到五分钟，并不停地摇晃振荡。

4.取出玻片，用滤纸吸去多余水分，但不使标本干燥，加一滴缓冲甘油，以盖玻片覆盖。

5.立即用荧光显微镜观察。观察标本的特异性荧光强度。
别 名 Ankyrin repeat-rich membrane-spanning protein; arms; KDIS_HUMAN; Kidins220; Kinase D interacting substance of 220 kDa; Kinase D-interacting substrate of 220 kDa; rgd 619949.

纯化方法 affinity purified by Protein A

储 存 液 Preservative: 15mM Sodium Azide, Constituents: 1% BSA, 0.01M PBS, pH 7.4

产品应用 ELISA=1:500-1000 IHC-P=1:100-500 IHC-F=1:100-500 Flow-Cyt=1:100-500 IF=1:100-500 

英文名称 Anti-Kidins220

中文名称 220kDa蛋白激酶D相互作用蛋白抗体

浓 度 1mg/1ml

规 格 0.2ml/200μg

抗体来源 Rabbit

克隆类型 polyclonal

交叉反应 Human, Mouse, Rat, Cow, Rabbit

产品类型 一抗

研究领域 心 细胞生物 神经生物学 信号转导 细胞凋亡 转录调节因子 激酶和磷酸酶 细胞膜受体

蛋白分子量 predicted molecular weight: 196kDa

性 状 Lyophilized or Liquid

免 疫 原 KLH conjugated synthetic peptide derived from human Kidins220

亚 型 IgG

抗体的制备过程：

1. 免疫原：普通的大分子蛋白，通过分子克隆构建载体并在大肠杆菌中进行诱导表达获得重组蛋白，纯化鉴定后可直接作为免疫原；小分子蛋白或化合物等分子量小，需要偶联载体对该分子进行改造才能使其成为具有免疫原性的抗原，常见偶联载体如BSA、OVA、HAS等。

2. 免疫动物：常用于制备抗血清的动物有豚鼠、家兔、鸡、大小鼠等，大量 时需要用到狗、绵羊、山羊等。

3. 免疫血清的收集：一般家兔、绵羊、山羊可采用静动脉采血，家兔、豚鼠、大鼠、鸡可采用采血，家兔、山羊、绵羊可采用采血。

4. 免疫血清的纯化与鉴定：得到的抗血清需要进一步的纯化，利用偶联了抗原的亲和柱进行层析，具有高效，特异性强，纯度高的特定。接着要鉴定纯化蛋白的含量、相对分子的质量、纯度以及特异性。

5. 免疫血清的保存：抗体一般比较稳定，在-80℃ ～-20 ℃可以保存约5年而不会影响效价，而真空干燥保存时间可以更久。联祖保存前需经除菌并添加防腐剂。

抗体分子标记技术：

（一）原理

当应用化学氧化法时(NaI)遇强氧化剂,离子被氧化为分子,所生成的自由分子可与某些基团进行卤化反应。蛋白质分子可进行卤化反应的基团主要为酪氨酸残基,某些组氨酸残基也可能进行化。在应用胺T( Chloramine T)法的实验中,所用的氧化剂(1,3,4,6- tetrachloro-3a,6adipheny l-glucoluril)强挥发性的有机溶剂中。该溶剂加入试管后,先让其挥发(即让氧化剂将试管包被),然后把Na125I和蛋白质液加入包被好的试管中,反应完成即将混合液移入他管终止反应。

（二）准备

1.试剂

经亲和层析纯化的多克隆抗体或单克隆抗体；0.5mol/L磷酸钠缓冲液,pH7.5；无载体的Na125I3.7GBq/ml(100mCi/ml)的NaOH液；100g/L三醋酸；70%乙醇；新鲜制备的含2mg/m1络胺T的0.5mol/L磷酸钠缓冲液(pH7.5）；胺T反应终止缓冲液；

2.仪器

凝胶过滤柱；￥-记数器；玻璃纤维滤。

（三）操作要点

1.用胺T法进行化,也可在大约pH7.0的缓冲液中进行；

2.如果氧化反应损伤蛋白质，可将抗体与异硫氰酸荧光素(FITC)偶联)胺T量减少到0.02mg/m，并将偏重亚硫酸液的浓度降到0.024mg/ml；

3. Iodogen-包被的试管可在干燥器中,于室温下保存多年；

4.1251标记的抗体,在制备后六周内均可使用(1251的半衰期为59.6天）；

5.要注意保证所用的Na1251是新鲜的,陈旧制剂的比活性低；

6.酪氨酸的碘化偶尔会对抗原的抗体结合位点有干扰,因此降低其结合能力,但这种情况很少见。

GTP溶液，2.5 mM（见关联产品）  规格：HPLC≥98%;10mgLathyrol

m7G(5')ppp(5')A帽结构类似物  规格：HPLC≥98%;10mgNotopterol

m7G(5')ppp(5')G帽结构类似物  规格：HPLC≥98%;20mgHydroxysafflor yellow A

NTP溶液，10 mM  规格：HPLC≥98%;20mgMadecassoside

SP6体外转录试剂盒  规格：HPLC≥98%;20mgMadecassic acid

T3体外转录试剂盒  规格：HPLC≥98%;20mgPurpurin

T7体外转录试剂盒  规格：HPLC≥98%;20mgpinocembrin

UTP溶液，100 mM  规格：HPLC≥98%;20mgSolanesol

UTP溶液，2.5 mM（见关联产品）  规格：HPLC≥98%;10mgApiin

天净沙Ribo-SPIA cDNA扩增试剂盒  规格：HPLC≥98%;5mgApigenin

天净沙SPIA扩增试剂盒（用于扩增DNA模板）（见关联产品）  规格：HPLC≥98%;10mgApigenin-7-O-β-D-

天净沙通用型MLPA试剂盒（停产）  规格：HPLC≥98%;20mgFraxin

单细胞扩增  规格：HPLC≥98%;20mgEsculin

单细胞裂解液（DNA）  规格：HPLC≥98%;20mgFraxetin

单细胞裂解液（RNA）  规格：HPLC≥98%;20mg6,7-Dihydroxycoumarin
髓鞘性蛋白(MBP)检测试剂盒(学发光免疫分析法) Bos taurus; Bovine (Cattle)

髓鞘性蛋白(MBP)检测试剂盒(学发光免疫分析法) Homo sapiens (Human)

皮质(CORT)检测试剂盒(学发光免疫分析法) General

脑素(BNP)检测试剂盒(学发光免疫分析法) Homo sapiens (Human)

220kDa蛋白激酶D相互作用蛋白抗体0.2ml/200μg免疫球蛋白M(IgM)检测试剂盒(学发光免疫分析法) Homo sapiens (Human)

免疫球蛋白M(IgM)检测试剂盒(学发光免疫分析法) Mus musculus (Mouse)

免疫球蛋白G(IgG)检测试剂盒(学发光免疫分析法) Bos taurus; Bovine (Cattle)

人嗜铬蛋白A(CgA)ELISA试剂盒 规格：96T/48T    

人嗜环蛋白/亲环素A(CyPA)ELISA试剂盒规格：96T/48T    

人嗜环蛋白/亲环素B(CyPB)ELISA试剂盒 规格：96T/48T    

人嗜性相关之RNA水解酵素家族成员1(EAR1)ELISA试剂盒规格：96T/48T    

人嗜性相关之RNA水解酵素家族成员12(EAR12)ELISA试剂盒规格：96T/48T    

人嗜性相关之RNA水解酵素家族成员2(EAR2)ELISA试剂盒规格：96T/48T    

人嗜性相关之RNA水解酵素家族成员3(EAR3)ELISA试剂盒规格：96T/48T    人海绵蛋白(TSP)ELISA试剂盒   96T/48   试剂盒   组装/原装

人调节蛋白(TM)ELISA试剂盒   规格：96T/48T    

人血清总补体(CH50)ELISA试剂盒   规格：96T/48T    

人血清一(NO)ELISA试剂盒   规格：96T/48T