抗体的制备过程:
1. 免疫原:普通的大分子蛋白,联祖通过分子克隆构建载体并在大肠杆菌中进行诱导表达获得重组蛋白,纯化鉴定后可直接作为免疫原;小分子蛋白或化合物等分子量小,需要偶联载体对该分子进行改造才能使其成为具有免疫原性的抗原,常见偶联载体如BSA、OVA、HAS等。
2. 免疫动物:常用于制备抗血清的动物有豚鼠、家兔、鸡、大小鼠等,大量 时需要用到狗、绵羊、山羊等。
3. 免疫血清的收集:一般家兔、绵羊、山羊可采用静动脉采血,家兔、豚鼠、大鼠、鸡可采血,家兔、山羊、绵羊可采用采血。
4. 免疫血清的纯化与鉴定:得到的抗血清需要进一步的纯化,利用偶联了抗原的亲和柱进行层析,具有高效,特异性强,纯度高的特定。接着要鉴定纯化蛋白的含量、相对分子的质量、纯度以及特异性。
5. 免疫血清的保存:抗体一般比较稳定,在-80℃ ~-20 ℃可以保存约5年而不会影响效价,而真空干燥保存时间可以更久。保存前需经除菌并添加防腐剂。
别 名 LAMA 1; LAMA; LAMA1; LAMB1; Laminin A chain; Laminin alpha 1; Laminin alpha 1 chain; Laminin B1 chain; Laminin subunit beta 1.
纯化方法 affinity purified by Protein A
储 存 液 0.01M PBS, pH 7.4 with 10 mg/ml BSA and 0.1% Sodium azide
产品应用 WB=1:100-500 ELISA=1:500-1000 IP=1:20-100 IHC-P=1:100-500 IHC-F=1:100-500 IF=1:100-500
产品名称 |
层粘连蛋白抗体0.1ml/100μg0.2ml/200μg |
英文名称 |
Anti-laminin |
货号 |
LZK65015 |
英文名称 Anti-laminin
中文名称 层粘连蛋白抗体
浓 度 1mg/1ml
规 格 0.1ml/100μg 0.2ml/200μg
抗体来源 Rabbit
克隆类型 polyclonal
交叉反应 Human, Mouse, Rat, Cow
产品类型 一抗
研究领域 细胞生物 免疫学 神经生物学 信号转导 细胞凋亡
蛋白分子量 predicted molecular weight: 131kDa
性 状 Lyophilized or Liquid
免 疫 原 KLH conjugated synthetic peptide derived from human laminin C-terminus
亚 型 IgG
免疫荧光技术的实验步骤:
一、准备好试剂与仪器:
磷酸盐缓冲盐水、荧光标记的抗体溶液、缓冲甘油、搪瓷桶三只、有盖搪瓷盒一只、荧光显微镜、玻片架、滤纸、37℃温箱等。
二、实验步骤
1.滴加0.01mol/L,pH7.4的PBS于待检标本片上,十分钟后弃去,使标本保持一定湿度。
2.滴加适当稀释的荧光标记的抗体溶液,使其完全覆盖标本,置于有盖搪瓷盒内,保温一定时间以三十分钟为参考。
3.取出玻片,置玻片架上,先用0.01mol/L,pH7.4的PBS冲洗后,再按顺序过0.01mol/L,pH7.4的PBS三缸浸泡,每缸三到五分钟,并不停地摇晃振荡。
4.取出玻片,用滤纸吸去多余水分,但不使标本干燥,加一滴缓冲甘油,以盖玻片覆盖。
5.立即用荧光显微镜观察。观察标本的特异性荧光强度。
抗体分子标记技术:
(一)原理
当应用化学氧化法时(NaI)遇强氧化剂,离子被氧化为分子,所生成的自由分子可与某些基团进行卤化反应。蛋白质分子可进行卤化反应的基团主要为酪氨酸残基,某些组氨酸残基也可能进行化。在应用胺T( Chloramine T)法的实验中,所用的氧化剂(1,3,4,6- tetrachloro-3a,6adipheny l-glucoluril)强挥发性的有机溶剂中。该溶剂加入试管后,先让其挥发(即让氧化剂将试管包被),然后把Na125I和蛋白质液加入包被好的试管中,反应完成即将混合液移入他管终止反应。
(二)准备
1.试剂
经亲和层析纯化的多克隆抗体或单克隆抗体;0.5mol/L磷酸钠缓冲液,pH7.5;无载体的Na125I3.7GBq/ml(100mCi/ml)的NaOH液;100g/L三醋酸;70%乙醇;新鲜制备的含2mg/m1络胺T的0.5mol/L磷酸钠缓冲液(pH7.5);胺T反应终止缓冲液;
2.仪器
凝胶过滤柱;¥-记数器;玻璃纤维滤。
(三)操作要点
1.用胺T法进行化,也可在大约pH7.0的缓冲液中进行;
2.如果氧化反应损伤蛋白质,可将抗体与异硫氰酸荧光素(FITC)偶联)胺T量减少到0.02mg/m,并将偏重亚硫酸液的浓度降到0.024mg/ml;
3. Iodogen-包被的试管可在干燥器中,于室温下保存多年;
4.1251标记的抗体,在制备后六周内均可使用(1251的半衰期为59.6天);
5.要注意保证所用的Na1251是新鲜的,陈旧制剂的比活性低;
6.酪氨酸的碘化偶尔会对抗原的抗体结合位点有干扰,因此降低其结合能力,但这种情况很少见。
棉子糖 纯度:≥98% Beta-Amyloid(1-28 2.5ml
莫诺苷 纯度:97%Beta-Amyloid(1-40 2.5mL
莫诺忍冬苷纯度:97%Beta-arrestin 1/2(beta-arrestin 1/2 2.5mlβ-抑制蛋白1/2抗原
拟人参皂苷-RT5纯度:≥98%Beta-casein( Beta-casein 100mg
鸟苷 纯度:≥98% Beta-catenin/ Beta-cats β-连环蛋白抗原(β-β链接素 1g
尿囊素 纯度:≥98% Beta-HCG (Human chorionic gonadotropin Beta 100mg人beta 亚基人绒毛膜激素抗原
柠檬 纯度:≥98% bFGF 碱性成纤维细胞生长子(多肽抗原 10mg
牛蒡子苷元纯度:≥98% BGP(Bone Gla-protein 100mg
牛雄去氧胆纯度:≥98% Bid (BH3 interacting domain death agonist 1gBH3结构域凋亡诱导蛋白抗原
牛七碱 纯度:≥98% Biotin/BSA 生物素偶联牛血清白蛋白 3 x 10mgBiotin/BSA 生物素偶联牛血清白蛋白
派利文碱纯度:≥98% Biotin/KLH 生物素偶联血蓝蛋白 100mgBiotin/KLH 生物素偶联血蓝蛋白
七叶苷纯度:≥98%BIRC5/Survivin variant 细胞凋亡抑制子4(抗原 25mg
漆黄素 纯度:≥98% BK channel (stretch-activated Kca channel 10mg
羟基酪醇纯度:≥97% BKCa channels(calcium-activated potassium channel 25mg钙激活钾通道蛋白
羟基吴茱萸碱纯度:≥98% BMP4(bone morphogenetic protein 4 10mg
多巴受体D1(DRD1)抗体 ELISAKitforDopamineReceptorD1(DRD1) 规格:48T/96T
免疫球蛋白E(IgE)抗体 ELISAKitforImmunoglobulinE(IgE) 规格:48T/96T
胃动素(MTL)抗体 ELISAKitforMotilin(MTL) 规格:48T/96T
Sacsin蛋白(SACS)抗体 ELISAKitforSacsin(SACS) 规格:48T/96T
紧张素转酶(ACE)抗体 ELISAKitforAngiotensinIConvertingEnzyme(ACE) 规格:48T/96T
跨膜蛋白27(TMEM27)抗体 ELISAKitforTransmembraneProtein27(TMEM27) 规格:48T/96T
纺锤体蛋白3(SPIN3)抗体 ELISAKitforSpindlin3(SPIN3) 规格:48T/96T
生长分子3(GDF3)抗体 ELISAKitforGrowthDifferentiationFactor3(GDF3) 规格:48T/96T
细胞间粘附分子2(ICAM2)抗体 ELISAKitforIntercellularAdhesionMolecule2(ICAM2) 规格:48T/96T
补体C5转酶(C5c)抗体 ELISAKitforComplementC5Convertase(C5c) 规格:48T/96T
皮肤衍生肽酶抑制子3(PI3)抗体 ELISAKitforPeptidaseInhibitor3,SkinDerived(PI3) 规格:48T/96T
信号素3D(SEMA3D)抗体 ELISAKitforSemaphorin3D(SEMA3D) 规格:48T/96T
网钙蛋白2(RCN2)抗体 ELISAKitforReticulocalbin2(RCN2) 规格:48T/96T
肌红蛋白(MYO)抗体 ELISAKitforMyoglobin(MYO) 规格:48T/96T
层粘连蛋白抗体0.1ml/100μg0.2ml/200μg核仁蛋白10(NOL10)抗体 ELISAKitforNucleolarProtein10(NOL10) 规格:48T/96T
白介素34(IL34)抗体 ELISAKitforInterleukin34(IL34) 规格:48T/96T
骨形成蛋白6(BMP6)抗体 ELISAKitforBoneMorphogeneticProtein6(BMP6) 规格:48T/96T