抗体的制备过程:
1. 免疫原:普通的大分子蛋白,联祖通过分子克隆构建载体并在大肠杆菌中进行诱导表达获得重组蛋白,纯化鉴定后可直接作为免疫原;小分子蛋白或化合物等分子量小,需要偶联载体对该分子进行改造才能使其成为具有免疫原性的抗原,常见偶联载体如BSA、OVA、HAS等。
2. 免疫动物:常用于制备抗血清的动物有豚鼠、家兔、鸡、大小鼠等,大量 时需要用到狗、绵羊、山羊等。
3. 免疫血清的收集:一般家兔、绵羊、山羊可采用静动脉采血,家兔、豚鼠、大鼠、鸡可采血,家兔、山羊、绵羊可采用采血。
4. 免疫血清的纯化与鉴定:得到的抗血清需要进一步的纯化,利用偶联了抗原的亲和柱进行层析,具有高效,特异性强,纯度高的特定。接着要鉴定纯化蛋白的含量、相对分子的质量、纯度以及特异性。
5. 免疫血清的保存:抗体一般比较稳定,在-80℃ ~-20 ℃可以保存约5年而不会影响效价,而真空干燥保存时间可以更久。保存前需经除菌并添加防腐剂。
别 名 ESOP 1; ESOP-1; ESOP1; LY 96; Ly-96; LY96; LY96_HUMAN; Lymphocyte antigen 96; Lymphocyte antigen 96; MD 2; md 2; MD 2 protein; MD2 protein; Myeloid differentiation protein 2; Protein MD 2; Protein MD-2; Protein MD2.
纯化方法 affinity purified by Protein A
储 存 液 0.01M PBS, pH 7.4 with 10 mg/ml BSA and 0.1% Sodium azide
产品应用 WB=1:100-500 ELISA=1:500-1000 IP=1:20-100 IHC-P=1:100-500 IHC-F=1:100-500 IF=1:100-500
产品名称 |
MD-2蛋白抗体0.1ml/100μg0.2ml/200μg |
英文名称 |
Anti-LY-96/MD-2 |
货号 |
LZK65028 |
英文名称 Anti-LY-96/MD-2
中文名称 MD-2蛋白抗体
浓 度 1mg/1ml
规 格 0.1ml/100μg 0.2ml/200μg
抗体来源 Rabbit
克隆类型 polyclonal
交叉反应 Human, Mouse, Rat, Cow, Horse, Rabbit
产品类型 一抗
研究领域 免疫学
蛋白分子量 predicted molecular weight: 16kDa
性 状 Lyophilized or Liquid
免 疫 原 KLH conjugated synthetic peptide derived from human LY-96 C-terminus
亚 型 IgG
免疫荧光技术的实验步骤:
一、准备好试剂与仪器:
磷酸盐缓冲盐水、荧光标记的抗体溶液、缓冲甘油、搪瓷桶三只、有盖搪瓷盒一只、荧光显微镜、玻片架、滤纸、37℃温箱等。
二、实验步骤
1.滴加0.01mol/L,pH7.4的PBS于待检标本片上,十分钟后弃去,使标本保持一定湿度。
2.滴加适当稀释的荧光标记的抗体溶液,使其完全覆盖标本,置于有盖搪瓷盒内,保温一定时间以三十分钟为参考。
3.取出玻片,置玻片架上,先用0.01mol/L,pH7.4的PBS冲洗后,再按顺序过0.01mol/L,pH7.4的PBS三缸浸泡,每缸三到五分钟,并不停地摇晃振荡。
4.取出玻片,用滤纸吸去多余水分,但不使标本干燥,加一滴缓冲甘油,以盖玻片覆盖。
5.立即用荧光显微镜观察。观察标本的特异性荧光强度。
抗体分子标记技术:
(一)原理
当应用化学氧化法时(NaI)遇强氧化剂,离子被氧化为分子,所生成的自由分子可与某些基团进行卤化反应。蛋白质分子可进行卤化反应的基团主要为酪氨酸残基,某些组氨酸残基也可能进行化。在应用胺T( Chloramine T)法的实验中,所用的氧化剂(1,3,4,6- tetrachloro-3a,6adipheny l-glucoluril)强挥发性的有机溶剂中。该溶剂加入试管后,先让其挥发(即让氧化剂将试管包被),然后把Na125I和蛋白质液加入包被好的试管中,反应完成即将混合液移入他管终止反应。
(二)准备
1.试剂
经亲和层析纯化的多克隆抗体或单克隆抗体;0.5mol/L磷酸钠缓冲液,pH7.5;无载体的Na125I3.7GBq/ml(100mCi/ml)的NaOH液;100g/L三醋酸;70%乙醇;新鲜制备的含2mg/m1络胺T的0.5mol/L磷酸钠缓冲液(pH7.5);胺T反应终止缓冲液;
2.仪器
凝胶过滤柱;¥-记数器;玻璃纤维滤。
(三)操作要点
1.用胺T法进行化,也可在大约pH7.0的缓冲液中进行;
2.如果氧化反应损伤蛋白质,可将抗体与异硫氰酸荧光素(FITC)偶联)胺T量减少到0.02mg/m,并将偏重亚硫酸液的浓度降到0.024mg/ml;
3. Iodogen-包被的试管可在干燥器中,于室温下保存多年;
4.1251标记的抗体,在制备后六周内均可使用(1251的半衰期为59.6天);
5.要注意保证所用的Na1251是新鲜的,陈旧制剂的比活性低;
6.酪氨酸的碘化偶尔会对抗原的抗体结合位点有干扰,因此降低其结合能力,但这种情况很少见。
南蛇藤素纯度:≥98%CNP/CNPase ( 2',3'-cyclic-nucleotide 3'-phosphodiesterase 500mgC型尿肽抗原
雷公藤吉碱纯度:≥97%CNTF(Ciliary Neurotrophic Factor 1g睫状神经营养子抗原
栎樱纯度:≥98%Collagen I(Anti-Collagen Type I 10mgI型胶原蛋白
连翘脂苷A纯度:≥95%Collagen III (Anti-Collagen Type III 5mg
连翘脂苷B纯度:≥98%Collagen III (Anti--Collagen Type III 10mg
灵芝A纯度:≥94%Collagen IV IV型胶原(Collagen Ⅳ Ⅳ 型胶原 5mg
灵芝B纯度:≥94%Collagen V (Anti--Collagen Type V 5 x 10mg
芦荟苷A纯度:≥98%COMP 软骨寡聚基质蛋白抗原 5 x 5mgCOMP 软骨寡聚基质蛋白抗原
鲁斯可皂苷元纯度:鉴别用(80%)Connexin-43(Cx43 19 x 250mg
罗汉果皂甙IV纯度:≥98%Connexin-45(CX45 19 x 1g
塞琳纯度:≥95%COX-1 (Prostaglandin-endoperoxide synthase-1 5mg素氧环酶1抗原
缌纯度:97%COX-2 (Prostaglandin-endoperoxide synthase-2 10mg
芒柄花素 刺芒柄花素纯度:≥98%C-Peptide( C-PEP 10mg
芒柄花素-7-O-葡萄糖苷纯度:95%c-phycocyanin(C-PC 100mg
没食子儿茶素GC纯度:97%CPT1A peptide 肉毒碱棕榈酰基转移酶1A多肽抗原 50mgCPT1A peptide 肉毒碱棕榈酰基转移酶1A多肽抗原
羧肽酶A4(CPA4)抗体 英文名称:CPA4 ELISA Kit,CPA4,
四旋蛋白1(TSPAN1)抗体 英文名称:TSPAN1 ELISA Kit,TSPAN1,
丝氨蛋白酶肽酶抑制子B支成员10(SERPINB10)抗体 英文名称:SERPINB10 ELISA Kit,SERPINB10,
衰老关键蛋白5(FBLN5)抗体 英文名称:FBLN5 ELISA Kit,FBLN5,
视黄醇结合蛋白1(RBP1)抗体 英文名称:RBP1 ELISA Kit,RBP1,
生长激素2(GH2)抗体 英文名称:GH2 ELISA Kit,GH2,
神经元导向子2(NAV2)抗体 英文名称:NAV2 ELISA Kit,NAV2,
神经介素B(NMB)抗体 英文名称:NMB ELISA Kit,NMB,
乙激酶1(ETNK1)抗体 英文名称:ETNK1 ELISA Kit,ETNK1,
血型糖蛋白A(GYPA)抗体 英文名称:GYPA ELISA Kit,GYPA,
岩藻糖激酶(FUK)抗体 英文名称:FUK ELISA Kit,FUK,
血红蛋白δ(HBδ)抗体 英文名称:HBδ ELISA Kit,HBδ,
嗅素4(OLFM4)抗体 英文名称:OLFM4 ELISA Kit,OLFM4,
MD-2蛋白抗体0.1ml/100μg0.2ml/200μg信号素4C(SEMA4C)抗体 英文名称:SEMA4C ELISA Kit,SEMA4C,
小白蛋白(PVALB)抗体 英文名称:PVALB ELISA Kit,PVALB,
衔接子相关蛋白复合体2μ1(AP2μ1)抗体 英文名称:AP2μ1 ELISA Kit,AP2μ1,
细胞周期素D3(CCND3)抗体 英文名称:CCND3 ELISA Kit,CCND3,