抗体的制备过程:
1. 免疫原:普通的大分子蛋白,联祖通过分子克隆构建载体并在大肠杆菌中进行诱导表达获得重组蛋白,纯化鉴定后可直接作为免疫原;小分子蛋白或化合物等分子量小,需要偶联载体对该分子进行改造才能使其成为具有免疫原性的抗原,常见偶联载体如BSA、OVA、HAS等。
2. 免疫动物:常用于制备抗血清的动物有豚鼠、家兔、鸡、大小鼠等,大量 时需要用到狗、绵羊、山羊等。
3. 免疫血清的收集:一般家兔、绵羊、山羊可采用静动脉采血,家兔、豚鼠、大鼠、鸡可采血,家兔、山羊、绵羊可采用采血。
4. 免疫血清的纯化与鉴定:得到的抗血清需要进一步的纯化,利用偶联了抗原的亲和柱进行层析,具有高效,特异性强,纯度高的特定。接着要鉴定纯化蛋白的含量、相对分子的质量、纯度以及特异性。
5. 免疫血清的保存:抗体一般比较稳定,在-80℃ ~-20 ℃可以保存约5年而不会影响效价,而真空干燥保存时间可以更久。保存前需经除菌并添加防腐剂。
别 名 EC 2.7.11.1; LIM domain kinase 1; LIM motif-containing protein kinase; LIMK; LIMK-1; LIMK2; LIMK-2; LIM domain kinase 2; LIMK1_HUMAN.
纯化方法 affinity purified by Protein A
储 存 液 0.01M PBS, pH 7.4 with 10 mg/ml BSA and 0.1% Sodium azide
产品应用 WB=1:100-500 ELISA=1:2000-5000 IHC-P=1:20-100 IHC-F=1:20-100 IF=1:20-100
产品名称 |
单丝氨酸蛋白激酶1抗体0.1ml/100μg0.2ml/200μg |
英文名称 |
Anti-LIMK1 |
货号 |
LZK65048 |
英文名称 Anti-LIMK1
中文名称 单丝氨酸蛋白激酶1抗体
浓 度 1mg/1ml
规 格 0.1ml/100μg 0.2ml/200μg
抗体来源 Rabbit
克隆类型 polyclonal
交叉反应 Human, Mouse, Rat, Cow, Rabbit
产品类型 一抗
研究领域 细胞生物 神经生物学 信号转导 激酶和磷酸酶
蛋白分子量 predicted molecular weight: 65-73kDa
性 状 Lyophilized or Liquid
免 疫 原 KLH conjugated synthetic peptide derived from human LIMK1
亚 型 IgG
免疫荧光技术的实验步骤:
一、准备好试剂与仪器:
磷酸盐缓冲盐水、荧光标记的抗体溶液、缓冲甘油、搪瓷桶三只、有盖搪瓷盒一只、荧光显微镜、玻片架、滤纸、37℃温箱等。
二、实验步骤
1.滴加0.01mol/L,pH7.4的PBS于待检标本片上,十分钟后弃去,使标本保持一定湿度。
2.滴加适当稀释的荧光标记的抗体溶液,使其完全覆盖标本,置于有盖搪瓷盒内,保温一定时间以三十分钟为参考。
3.取出玻片,置玻片架上,先用0.01mol/L,pH7.4的PBS冲洗后,再按顺序过0.01mol/L,pH7.4的PBS三缸浸泡,每缸三到五分钟,并不停地摇晃振荡。
4.取出玻片,用滤纸吸去多余水分,但不使标本干燥,加一滴缓冲甘油,以盖玻片覆盖。
5.立即用荧光显微镜观察。观察标本的特异性荧光强度。
抗体分子标记技术:
(一)原理
当应用化学氧化法时(NaI)遇强氧化剂,离子被氧化为分子,所生成的自由分子可与某些基团进行卤化反应。蛋白质分子可进行卤化反应的基团主要为酪氨酸残基,某些组氨酸残基也可能进行化。在应用胺T( Chloramine T)法的实验中,所用的氧化剂(1,3,4,6- tetrachloro-3a,6adipheny l-glucoluril)强挥发性的有机溶剂中。该溶剂加入试管后,先让其挥发(即让氧化剂将试管包被),然后把Na125I和蛋白质液加入包被好的试管中,反应完成即将混合液移入他管终止反应。
(二)准备
1.试剂
经亲和层析纯化的多克隆抗体或单克隆抗体;0.5mol/L磷酸钠缓冲液,pH7.5;无载体的Na125I3.7GBq/ml(100mCi/ml)的NaOH液;100g/L三醋酸;70%乙醇;新鲜制备的含2mg/m1络胺T的0.5mol/L磷酸钠缓冲液(pH7.5);胺T反应终止缓冲液;
2.仪器
凝胶过滤柱;¥-记数器;玻璃纤维滤。
(三)操作要点
1.用胺T法进行化,也可在大约pH7.0的缓冲液中进行;
2.如果氧化反应损伤蛋白质,可将抗体与异硫氰酸荧光素(FITC)偶联)胺T量减少到0.02mg/m,并将偏重亚硫酸液的浓度降到0.024mg/ml;
3. Iodogen-包被的试管可在干燥器中,于室温下保存多年;
4.1251标记的抗体,在制备后六周内均可使用(1251的半衰期为59.6天);
5.要注意保证所用的Na1251是新鲜的,陈旧制剂的比活性低;
6.酪氨酸的碘化偶尔会对抗原的抗体结合位点有干扰,因此降低其结合能力,但这种情况很少见。
曲司铵标准品纯度:≥92% HEV 病毒(抗原 5g
托吡卡标准品纯度:≥98% HGF(hepatocyte growth factor 1g肝细胞生长子抗原
三羟甲基氨基甲标准品纯度:≥98% HGV(Hepatitis G vivus 100mg
竹桃霉素三乙酯标准品纯度:≥98% HHV8/ORF K2(Human herpesvirus 8 type P 5mg人类病毒8抗原
三水杨标准品纯度:≥98%HHV8/ORF K2/vIL-6(Human herpesvirus 8 10mg人类病毒8抗原
盐曲普利啶标准品纯度:95%HHV8/ORF50(Human herpesvirus 8 type P 100mg人类病毒8抗原
盐曲吡那敏标准品纯度:≥98% HHV8/ORF50(Human herpesvirus 8 type P 25mg人类病毒8抗原
三甲基补骨脂素标准品纯度:≥95% HHV8/ORF50(Human herpesvirus 8 type P 10mg人类病毒8抗原
马来曲米帕明标准品纯度:≥98% HIF-1 Beta/ARNT1(Hypoxia-inducible factor-1 Beta 5mg缺氧诱导子1β 抗原
甲氧苄啶标准品纯度:≥97% HIF-1Alpha 缺氧诱导子1α 多肽 10mgHIF-1Alpha 缺氧诱导子1α 多肽
三甲双标准品纯度:≥98% HIF-2 Alpha (Hypoxia-inducible factor-2 Alpha 5mg缺氧诱导子2α 抗原
酒石异丁嗪标准品纯度:≥98% Histone H1b(Histone H1.4 100mg组蛋白H1b抗原
盐海索标准品纯度:≥96%histone H3-like protein 组蛋白H3样蛋白(C端多肽 10mg
曲胸苷标准品纯度:≥99% histone H3-like protein 组蛋白H3样蛋白(N端多肽 100mg
盐三丙嗪标准品纯度:≥98% histone H3-like protein 组蛋白H3样蛋白多肽 50mghistone H3-like protein 组蛋白H3样蛋白多肽
Smoothelin蛋白(SMTN)抗体 英文名称:SMTN ELISA Kit,SMTN,
谷光甘肽合成酶(GSS)抗体 英文名称:GSS ELISA Kit,GSS,
肝配蛋白B3(EFNB3)抗体 英文名称:EFNB3 ELISA Kit,EFNB3,
高尔基体蛋白A3(GOLGA3)抗体 英文名称:GOLGA3 ELISA Kit,GOLGA3,
盖膜蛋白α(TECTα)抗体 英文名称:TECTα ELISA Kit,TECTα,
钙蛋白酶11(CAPN11)抗体 英文名称:CAPN11 ELISA Kit,CAPN11,
分泌跨膜蛋白1(SECTM1)抗体 英文名称:SECTM1 ELISA Kit,SECTM1,
防御素β131(DEFβ131)抗体 英文名称:DEFβ131 ELISA Kit,DEFβ131,
泛素羧基端酯酶L1(UCHL1)抗体 英文名称:UCHL1 ELISA Kit,UCHL1,
二氢辛脱氢酶(DLD)抗体 英文名称:DLD ELISA Kit,DLD,
多配体蛋白聚糖1(SDC1)抗体 英文名称:SDC1 ELISA Kit,SDC1,
动力蛋白胞浆1重链1(DYNC1H1)抗体 英文名称:DYNC1H1 ELISA Kit,DYNC1H1,
人抗核糖体P蛋白抗体(ARPA)抗体 英文名称:ARPA ELISA Kit,ARPA,
解整合素金属蛋白酶12(ADAM12)抗体 英文名称:ADAM12 ELISA Kit,ADAM12,
单丝氨酸蛋白激酶1抗体0.1ml/100μg0.2ml/200μg痉挛蛋白(SPAST)抗体 英文名称:SPAST ELISA Kit,SPAST,
角蛋白12(KRT12)抗体 英文名称:KRT12 ELISA Kit,KRT12,
甲状腺素受体β(THRβ)抗体 英文名称:THRβ ELISA Kit,THRβ,