免疫荧光技术的实验步骤:
一、准备好试剂与仪器:
磷酸盐缓冲盐水、荧光标记的抗体溶液、缓冲甘油、搪瓷桶三只、有盖搪瓷盒一只、荧光显微镜、玻片架、滤纸、37℃温箱等。
二、实验步骤
1.滴加0.01mol/L,pH7.4的PBS于待检标本片上,十分钟后弃去,使标本保持一定湿度。
2.滴加适当稀释的荧光标记的抗体溶液,使其完全覆盖标本,置于有盖搪瓷盒内,保温一定时间以三十分钟为参考。
3.取出玻片,置玻片架上,先用0.01mol/L,pH7.4的PBS冲洗后,再按顺序过0.01mol/L,pH7.4的PBS三缸浸泡,每缸三到五分钟,并不停地摇晃振荡。
4.取出玻片,用滤纸吸去多余水分,但不使标本干燥,加一滴缓冲甘油,以盖玻片覆盖。
5.立即用荧光显微镜观察。观察标本的特异性荧光强度。
别 名 Cytosolic inhibitor of Nrf2; INrf 2; INrf2; Keap 1; KEAP1; KEAP1_HUMAN; Kelch like ECH associated protein 1; Kelch like protein 19; Kelch-like ECH-associated protein 1; Kelch-like protein 19; KIAA0132; KLHL 19; KLHL19; MGC10630; MGC1114; MGC20887; MGC4407; MGC9454.
纯化方法 affinity purified by Protein A
储 存 液 Preservative: 15mM Sodium Azide, Constituents: 1% BSA, 0.01M PBS, pH 7.4
产品应用 WB=1:100-500 ELISA=1:500-1000 IP=1:20-100 IHC-P=1:100-500 IHC-F=1:100-500 ICC=1:100-500 IF=1:100-500
产品名称 |
胞质接头蛋白Keap10.1ml/100μg0.2ml/200μg |
英文名称 |
Anti-KEAP1 |
货号 |
LZK65055 |
英文名称 Anti-KEAP1
中文名称 胞质接头蛋白Keap1
浓 度 1mg/1ml
规 格 0.1ml/100μg 0.2ml/200μg
抗体来源 Rabbit
克隆类型 polyclonal
交叉反应 Human, Mouse, Rat, Dog, Pig, Cow, Rabbit
产品类型 一抗
研究领域 细胞生物 发育生物学 信号转导 细胞凋亡 转录调节因子 激酶和磷酸酶
蛋白分子量 predicted molecular weight: 69kDa
性 状 Lyophilized or Liquid
免 疫 原 KLH conjugated synthetic peptide derived from human KEAP1
亚 型 IgG
抗体的制备过程:
1. 免疫原:普通的大分子蛋白,通过分子克隆构建载体并在大肠杆菌中进行诱导表达获得重组蛋白,纯化鉴定后可直接作为免疫原;小分子蛋白或化合物等分子量小,需要偶联载体对该分子进行改造才能使其成为具有免疫原性的抗原,常见偶联载体如BSA、OVA、HAS等。
2. 免疫动物:常用于制备抗血清的动物有豚鼠、家兔、鸡、大小鼠等,大量 时需要用到狗、绵羊、山羊等。
3. 免疫血清的收集:一般家兔、绵羊、山羊可采用静动脉采血,家兔、豚鼠、大鼠、鸡可采用采血,家兔、山羊、绵羊可采用采血。
4. 免疫血清的纯化与鉴定:得到的抗血清需要进一步的纯化,利用偶联了抗原的亲和柱进行层析,具有高效,特异性强,纯度高的特定。接着要鉴定纯化蛋白的含量、相对分子的质量、纯度以及特异性。
5. 免疫血清的保存:抗体一般比较稳定,在-80℃ ~-20 ℃可以保存约5年而不会影响效价,而真空干燥保存时间可以更久。联祖保存前需经除菌并添加防腐剂。
抗体分子标记技术:
(一)原理
当应用化学氧化法时(NaI)遇强氧化剂,离子被氧化为分子,所生成的自由分子可与某些基团进行卤化反应。蛋白质分子可进行卤化反应的基团主要为酪氨酸残基,某些组氨酸残基也可能进行化。在应用胺T( Chloramine T)法的实验中,所用的氧化剂(1,3,4,6- tetrachloro-3a,6adipheny l-glucoluril)强挥发性的有机溶剂中。该溶剂加入试管后,先让其挥发(即让氧化剂将试管包被),然后把Na125I和蛋白质液加入包被好的试管中,反应完成即将混合液移入他管终止反应。
(二)准备
1.试剂
经亲和层析纯化的多克隆抗体或单克隆抗体;0.5mol/L磷酸钠缓冲液,pH7.5;无载体的Na125I3.7GBq/ml(100mCi/ml)的NaOH液;100g/L三醋酸;70%乙醇;新鲜制备的含2mg/m1络胺T的0.5mol/L磷酸钠缓冲液(pH7.5);胺T反应终止缓冲液;
2.仪器
凝胶过滤柱;¥-记数器;玻璃纤维滤。
(三)操作要点
1.用胺T法进行化,也可在大约pH7.0的缓冲液中进行;
2.如果氧化反应损伤蛋白质,可将抗体与异硫氰酸荧光素(FITC)偶联)胺T量减少到0.02mg/m,并将偏重亚硫酸液的浓度降到0.024mg/ml;
3. Iodogen-包被的试管可在干燥器中,于室温下保存多年;
4.1251标记的抗体,在制备后六周内均可使用(1251的半衰期为59.6天);
5.要注意保证所用的Na1251是新鲜的,陈旧制剂的比活性低;
6.酪氨酸的碘化偶尔会对抗原的抗体结合位点有干扰,因此降低其结合能力,但这种情况很少见。
枸橼他莫昔芬标准品纯度:≥95%Insulin (from porcine pancreas 1g
他布标准品纯度:≥98% Insulin protein (Active 100mg重组人细胞子
塔格糖标准品纯度:≥98% Insulin protein (from porcine pancreas 1g猪
他克莫司标准品纯度:≥98% Insulin Receptor- Beta(ISR- Beta 100mg
盐他克林标准品纯度:0.97Insulin Receptor(ISR 10g
舒芬标准品纯度:≥98% Insulin Receptor-Alpha(ISR-Alpha 1g
琥珀舒马曲坦标准品纯度:≥98% Insulin Receptor-Alpha(ISR-Alpha 1mg
舒马曲坦标准品纯度:≥98% Integrin a7(integrin alpha 7 5mg整合素α7抗原
舒利标准品纯度:97%Integrin alpha 1 整合素α1抗原 500GIntegrin alpha 1 整合素α1抗原
舒林相关物质A标准品纯度:97%Integrin Alpha 4/ITGA4(Integrin alpha 4 25G
舒林标准品纯度:≥98%Integrin alpha E2 peptide 整合素alpha E2抗原 25mgIntegrin alpha E2 peptide 整合素alpha E2抗原
异噁标准品纯度:≥98% Integrin alpha V 巨噬细胞来源的趋子αV多肽 10mgIntegrin alpha V 巨噬细胞来源的趋子αV多肽
二甲异噁唑标准品纯度:≥98% Integrin alpha V/CD51 peptide 整合素αV抗原 5 x 10mgIntegrin alpha V/CD51 peptide 整合素αV抗原
保泰松标准品纯度:≥98% Integrin Alpha3 整合素α3抗原 5 x 5mgIntegrin Alpha3 整合素α3抗原
噻唑标准品纯度:≥98% Integrin Alpha4 Beta7/LPAM-1 (Lymphocyte Peyer’s patch Adhesion Molecule 1/Integrin alpha4,beta7 25mg整合素α4β7抗原
CD200分子(CD200)抗体 英文名称:CD200 ELISA Kit,CD200,
Bcl2关联X蛋白(Bax)抗体 英文名称:Bax ELISA Kit,Bax,
AMP激活蛋白激酶α1(PRKAα1)抗体 英文名称:PRKAα1 ELISA Kit,PRKAα1,
促微管蛋白聚合蛋白(TPPP)抗体 英文名称:TPPP ELISA Kit,TPPP,
补体受体4(CR4)抗体 英文名称:CR4 ELISA Kit,CR4,
成簇蛋白(TUFT)抗体 英文名称:TUFT ELISA Kit,TUFT,
表面活性物质关联蛋白B(SPB)抗体 英文名称:SPB ELISA Kit,SPB,
半乳糖凝集素9B(GAL9B)抗体 英文名称:GAL9B ELISA Kit,GAL9B,
白细胞关联免疫球蛋白样受体2(LAIR2)抗体 英文名称:LAIR2 ELISA Kit,LAIR2,
白介素1受体关联激酶3(IRAK3)抗体 英文名称:IRAK3 ELISA Kit,IRAK3,
氨甲基转移酶(AMT)抗体 英文名称:AMT ELISA Kit,AMT,
胞质接头蛋白Keap10.1ml/100μg0.2ml/200μgβ-骨胶原交联(βCTx)抗体 英文名称:βCTx ELISA Kit,βCTx,
V-Yes-1Yamaguchi病毒相关癌基同源物(LYN)抗体 英文名称:LYN ELISA Kit,LYN,
Tomoregulin1蛋白(TR1)抗体 英文名称:TR1 ELISA Kit,TR1,
胱天蛋白酶12(CASP12)抗体 英文名称:CASP12 ELISA Kit,CASP12,
高迁移率族蛋白1(HMG1)抗体 英文名称:HMG1 ELISA Kit,HMG1,
谷胱甘肽S转移酶ω1(GSTω1)抗体 英文名称:GSTω1 ELISA Kit,GSTω1,