抗体的制备过程:
1. 免疫原:普通的大分子蛋白,联祖通过分子克隆构建载体并在大肠杆菌中进行诱导表达获得重组蛋白,纯化鉴定后可直接作为免疫原;小分子蛋白或化合物等分子量小,需要偶联载体对该分子进行改造才能使其成为具有免疫原性的抗原,常见偶联载体如BSA、OVA、HAS等。
2. 免疫动物:常用于制备抗血清的动物有豚鼠、家兔、鸡、大小鼠等,大量 时需要用到狗、绵羊、山羊等。
3. 免疫血清的收集:一般家兔、绵羊、山羊可采用静动脉采血,家兔、豚鼠、大鼠、鸡可采血,家兔、山羊、绵羊可采用采血。
4. 免疫血清的纯化与鉴定:得到的抗血清需要进一步的纯化,利用偶联了抗原的亲和柱进行层析,具有高效,特异性强,纯度高的特定。接着要鉴定纯化蛋白的含量、相对分子的质量、纯度以及特异性。
5. 免疫血清的保存:抗体一般比较稳定,在-80℃ ~-20 ℃可以保存约5年而不会影响效价,而真空干燥保存时间可以更久。保存前需经除菌并添加防腐剂。
别 名 Electroneutral potassium chloride cotransporter 2; Electroneutral potassium-chloride cotransporter 2; Erythroid K Cl cotransporter 2; Erythroid K-Cl cotransporter 2; Furosemide sensitive K Cl cotransporter; hKCC2; K-Cl cotransporter 2; KCC 2; KCC2; KIAA1176; Neuronal K Cl cotransporter; Neuronal K-Cl cotransporter; S12A5; S12A5_HUMAN; SLC12A5; Solute carrier family 12 (potassium chloride transporter) member 5; Solute carrier family 12 member 5.
纯化方法 affinity purified by Protein A
储 存 液 Preservative: 15mM Sodium Azide, Constituents: 1% BSA, 0.01M PBS, pH 7.4
产品应用 WB=1:100-500 ELISA=1:500-1000 IP=1:20-100 IHC-P=1:100-500 IHC-F=1:100-500 Flow-Cyt=1:20-100 IF=1:50-200
产品名称 |
神经细胞钾氯离子转运蛋白抗体0.1ml/100μg0.2ml/200μg |
英文名称 |
Anti-KCC2/SLC12A5 |
货号 |
LZK65069 |
英文名称 Anti-KCC2/SLC12A5
中文名称 神经细胞钾氯离子转运蛋白抗体
浓 度 1mg/1ml
规 格 0.1ml/100μg 0.2ml/200μg
抗体来源 Rabbit
克隆类型 polyclonal
交叉反应 Human, Mouse, Rat, Chicken, Dog, Pig, Cow, Horse
产品类型 一抗
研究领域 细胞生物 免疫学 神经生物学 通道蛋白
蛋白分子量 predicted molecular weight: 123kDa
性 状 Lyophilized or Liquid
免 疫 原 KLH conjugated synthetic peptide derived from human KCC2/SLC12A5
亚 型 IgG
免疫荧光技术的实验步骤:
一、准备好试剂与仪器:
磷酸盐缓冲盐水、荧光标记的抗体溶液、缓冲甘油、搪瓷桶三只、有盖搪瓷盒一只、荧光显微镜、玻片架、滤纸、37℃温箱等。
二、实验步骤
1.滴加0.01mol/L,pH7.4的PBS于待检标本片上,十分钟后弃去,使标本保持一定湿度。
2.滴加适当稀释的荧光标记的抗体溶液,使其完全覆盖标本,置于有盖搪瓷盒内,保温一定时间以三十分钟为参考。
3.取出玻片,置玻片架上,先用0.01mol/L,pH7.4的PBS冲洗后,再按顺序过0.01mol/L,pH7.4的PBS三缸浸泡,每缸三到五分钟,并不停地摇晃振荡。
4.取出玻片,用滤纸吸去多余水分,但不使标本干燥,加一滴缓冲甘油,以盖玻片覆盖。
5.立即用荧光显微镜观察。观察标本的特异性荧光强度。
抗体分子标记技术:
(一)原理
当应用化学氧化法时(NaI)遇强氧化剂,离子被氧化为分子,所生成的自由分子可与某些基团进行卤化反应。蛋白质分子可进行卤化反应的基团主要为酪氨酸残基,某些组氨酸残基也可能进行化。在应用胺T( Chloramine T)法的实验中,所用的氧化剂(1,3,4,6- tetrachloro-3a,6adipheny l-glucoluril)强挥发性的有机溶剂中。该溶剂加入试管后,先让其挥发(即让氧化剂将试管包被),然后把Na125I和蛋白质液加入包被好的试管中,反应完成即将混合液移入他管终止反应。
(二)准备
1.试剂
经亲和层析纯化的多克隆抗体或单克隆抗体;0.5mol/L磷酸钠缓冲液,pH7.5;无载体的Na125I3.7GBq/ml(100mCi/ml)的NaOH液;100g/L三醋酸;70%乙醇;新鲜制备的含2mg/m1络胺T的0.5mol/L磷酸钠缓冲液(pH7.5);胺T反应终止缓冲液;
2.仪器
凝胶过滤柱;¥-记数器;玻璃纤维滤。
(三)操作要点
1.用胺T法进行化,也可在大约pH7.0的缓冲液中进行;
2.如果氧化反应损伤蛋白质,可将抗体与异硫氰酸荧光素(FITC)偶联)胺T量减少到0.02mg/m,并将偏重亚硫酸液的浓度降到0.024mg/ml;
3. Iodogen-包被的试管可在干燥器中,于室温下保存多年;
4.1251标记的抗体,在制备后六周内均可使用(1251的半衰期为59.6天);
5.要注意保证所用的Na1251是新鲜的,陈旧制剂的比活性低;
6.酪氨酸的碘化偶尔会对抗原的抗体结合位点有干扰,因此降低其结合能力,但这种情况很少见。
牡荆树提取物标准品纯度:鉴别用(80%)Nm23-H1 (nucleoside dIPhosphatase kinase A 50mg抑制基抗原
纤维素粉标准品纯度:≥98%Nociceptin 孤菲肽(痛敏肽 100mg
猫爪草提取物标准品纯度:≥95%Nociceptin receptor 孤菲肽受体(痛敏肽受体 1g
黑升麻提取物标准品纯度:97%Nogo R 轴索过度生长抑制子受体(多肽抗原 1g
越橘提取物标准品纯度:≥98%Nogo-66 1-40 Nogo-66 (1-40 10mg
亚洲人参提取物粉标准品纯度:95%Nogo-A 轴索过度生长抑制子-A(抗原 5mg
醉茄粉末提取物标准品纯度:97%Nogo-B/A 轴索过度生长抑制子-B/A抗原 10mgNogo-B/A 轴索过度生长抑制子-B/A抗原
穿心莲提取物标准品纯度:≥98%NOS-1(bNOS:neuronal NOS:nNOS:Nitric Oxide synthase-1 25mg
交联聚维标准品纯度:≥98%NOS-2 (iNOS 10mg
糖铝钾标准品纯度:≥95%NOS-2 peptide 一氧合成酶-2多肽抗原 250mgNOS-2 peptide 一氧合成酶-2多肽抗原
山梨钾标准品纯度:≥97%NOS-3 (eNOS 100mg
钾标准品纯度:98%Notch1/MOTC(Neurogenic locus notch homolog protein 1 25mg跨膜受体蛋白Notch-1抗原
愈创木钾标准品纯度:≥97%NPY ( Neuropeptide Y 25mg
葡萄糖钾标准品纯度:≥95%NPY ( Neuropeptide Y 10mg
柠檬钾标准品纯度:≥95%NPY1R (neuropeptide Y1 receptor 5mg神经肽Y1受体抗原
N-转移酶8样蛋白(NAT8L)抗体 英文名称:NAT8L ELISA Kit,NAT8L,
Rab亲和蛋白3A(RPH3A)抗体 英文名称:RPH3A ELISA Kit,RPH3A,
Notch2氨基端样蛋白(NOTCH2NL)抗体 英文名称:NOTCH2NL ELISA Kit,NOTCH2NL,
MutY同源物(MUTYH)抗体 英文名称:MUTYH ELISA Kit,MUTYH,
Kruppel样子2(KLF2)抗体 英文名称:KLF2 ELISA Kit,KLF2,
G抗原5(GAGE5)抗体 英文名称:GAGE5 ELISA Kit,GAGE5,
Fas凋亡抑制分子3(FAIM3)抗体 英文名称:FAIM3 ELISA Kit,FAIM3,
Dendrin蛋白(DDN)抗体 英文名称:DDN ELISA Kit,DDN,
Consortin蛋白(CNST)抗体 英文名称:CNST ELISA Kit,CNST,
C4结合蛋白β(C4BPβ)抗体 英文名称:C4BPβ ELISA Kit,C4BPβ,
蛋白激酶抑制子γ(PKIγ)抗体 英文名称:PKIγ ELISA Kit,PKIγ,
丛状蛋白A1(PLXNA1)抗体 英文名称:PLXNA1 ELISA Kit,PLXNA1,
胆盐依赖性脂肪酶(BSDL)抗体 英文名称:BSDL ELISA Kit,BSDL,
神经细胞钾氯离子转运蛋白抗体0.1ml/100μg0.2ml/200μg肠碱性酶(ALPI)抗体 英文名称:ALPI ELISA Kit,ALPI,
补体成分3(C3)抗体 英文名称:C3 ELISA Kit,C3,
保护素(CD59)抗体 英文名称:CD59 ELISA Kit,CD59,
半乳凝素8(GAL8)抗体 英文名称:GAL8 ELISA Kit,GAL8,