血液样本的收集:
全血根据收集的条件,分成不抗凝和抗凝两种。同时,不抗凝分离出的上层黄色的液体我们称之为血清;抗凝分离出的上层黄色的液体我们称之为血浆。
1、不抗凝收集血清:将收集好的全血,静置1~2小时,直接低速离心分离出血清待用或保存。
2、抗凝收集血浆: 收集抗凝全血,轻轻颠倒充分抗凝后,可直接低速离心分离血浆(也可静置半小时左右再低速离心分离血浆)待用或保存。根据不同抗凝剂的性能特征,选择合适的抗凝剂。实验室常用的抗凝剂有肝素的各种盐、EDTA及枸橼酸钠。
【友情提示】:本产品仅供科研研究使用,不得用于人体临床直接检测。避免给您带来不必要的损失,请仔细阅读购买说明!
产品名称 |
规格 |
检测方法 |
货号 |
HK己糖激酶测试剂盒紫外分光光度法 |
100管/96样 |
微量法 |
LZ-01599S |
商品介绍:
测定意义 测定原理: MS催化乙酰CoA和乙醛酸产生苹果酸,同时生成辅酶A,辅酶A使无色的DTNB转变成黄色的TNB,在 412nm处有特征吸光值。 需自备的仪器和用品: 酶标仪、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、96孔板、研钵、冰、和蒸馏水 |
实验通用规则:
1、将液体加到酶标孔中时,避免枪头和孔内液体接触,可使枪头上的液滴和孔壁接触,液滴会自然流下去。
2、用枪吸取液体时速度不能太快,以免产生气泡而使吸取量不准确。
3、温浴时,要用不干胶或胶带纸封好酶标板,防止水分的蒸发。
4、洗液不够时,可用蒸馏水自行配制PH7.4,0.02M的磷酸缓冲液,加入0.1%的吐温20作为洗液。加入1/1000的叠氮钠后可长期保存。
5、实验时,要使底物避光保存。
6、洗板时,每次洗液加入后,应静置1分钟,使清洗更加。没有洗板机时,倒去液体后,要将酶标板在报纸或毛纸上用力拍干。
7、要在实验前1小时将试剂盒从冰箱中取出,使各种试剂都恢复到室温,以使结果更稳定。
8、吸取液体时,要用量程和需要量接近的枪去吸,减少误差。
9、要配备20ul、50ul、100ul、1000ul和排枪各一支。吸取不同的液体后,要更换枪头。即使是吸取标准品时。
10、液体全部加完后,可将酶标板在桌子上平行轻轻晃动30秒,混匀液体。也可以用酶标仪的晃动功能。
操作步骤:
实验开始前,各试剂均应平衡至室温(试剂不能直接在37℃溶解);试剂或样品稀释时,均需混匀,混匀时尽量避免起泡。实验前应预测样品含量,如样品浓度过高时,应对样品进行稀释,以使稀释后的样品符合试剂盒的检测范围,计算时再乘以相应的稀释倍数。
1. 加样:分别设空白孔、标准孔、待测样品孔。空白孔加样品稀释液100μl,余孔分别加标准品或待测样品100μl,注意不要有气泡,加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀,酶标板加上盖或覆膜,37℃反应120分钟。为保证实验结果有效性,每次实验请使用新的标准品溶液。
2. 弃去液体,甩干,不用洗涤。每孔加检测溶液A工作液 100μl(在使用前一小时内配制),酶标板加上覆膜, 37℃反应60分钟。
3. 温育60分钟后,弃去孔内液体,甩干,洗板3次,每次浸泡1-2分钟,大约400μl/每孔,甩干(也可轻拍将孔内液体拍干)。
4. 每孔加检测溶液B工作液(同检测A工作液) 100μl,酶标板加上覆膜37℃反应60分钟。
5. 温育60分钟后,弃去孔内液体,甩干,洗板5次,每次浸泡1-2分钟,350μl/每孔,甩干(也可轻拍将孔内液体拍干)。
6. 依序每孔加底物溶液90μl,酶标板加上覆膜37℃避光显色(30分钟内,此时肉眼可见标准品的前3-4孔有明显的梯度兰色,后3-4孔梯度不明显,即可终止)。
7. 依序每孔加终止溶液50μl,终止反应,此时蓝色立转黄色。终止液的加入顺序应尽量与底物液的加入顺序相同。为了保证实验结果的准确性,底物反应时间到后应尽快加入终止液。
8. 用酶联仪在450nm波长依序测量各孔的光密度(OD值)。在加终止液后立即进行检测。
人T瘤转基因细胞;Jurkat D,E2-叠氮腺苷质量规格:美国进口2-Azido Adenosine
CD5 Others Mouse 小鼠 CD5 / LEU1 人细胞裂解液 (阳性对照) 2',3'-亚异丙基腺苷质量规格:美国进口2',3'-Isopropylidene Adenosine
人导管癌细胞;CFPAC-12-代-5'-乙基酰胺基腺苷质量规格:美国进口2-Iodo-5'-ethylcarboxamido Adenosine
ERBB2 Others Mouse 小鼠 HER2 / ErbB2 人细胞裂解液 (阳性对照) 瑞加德质量规格:美国进口Regadenoson
CoC1(悬浮) 5-氨基水杨酸,美沙拉秦质量规格:>98%,BR5-Aminosalicylic
acid
HK-2细胞,人肾小管近段上皮细胞 负鼠肾细胞,OK细胞
CL-0389NCI-H1688(人典型小细胞细胞)5×106cells/瓶×2GLYCEROL甘油蛋白组学级无色至几乎无色粘稠液体RTsigma
CAL-27(人舌鳞癌细胞) 5×106cells/瓶×2烟酰安腺嘌呤双核苷醋 BqTc-NICOTINcMIDq cDqNINq DINUCLqOTIDq 23-84-9
HCM-c 人类心肌细胞 500,000cells 人肺动脉平滑肌细胞HPASMC中性红 (高) Neutral Red (Dye content, >90%) 553-24-2 1G 染色剂
SGC-7901, 人胃腺癌细胞系β-D-葡萄糖-6-嶙酸钠盐,英文名或英文缩写:G-6-P-Na,级别:高,98%,规格:100毫克
IL18R1 Others Cynomolgus 食蟹猴 IL18R1 人细胞裂解液 (阳性对照) L-pxenylalanine
25g/100g/250g/500g 国产
豚鼠胚胎细胞;104C1噻奈普汀钠盐Tianeptine salt质量规格:>98%,BR
FKBP7 Others Human 人 PPIase / FKBP7 人细胞裂解液 (阳性对照) D-谷氨酰胺D-Glutamine 质量规格:0.98
人成纤维细胞完全培养基 100mL扎托布洛芬Zaltoprofen质量规格:>98%
HaCaT细胞,人正常皮肤细胞 柰瑟氏菌 小鼠树突状细胞低转移细胞(VAP33-GFP融合蛋白稳定过表达);DG6-VAP33-GFP甘胆酸钠 ;甘氨胆酸钠 Glycocholate Hydrate质量规格:>98%
CCL13 Protein Human 重组人 CCL13 / MCP-4 蛋白 (His 标签)甘露醇;D-甘露糖醇Mannitol;D-Mannitol质量规格:>99%,BR
HK己糖激酶测试剂盒紫外分光光度法CM-H025人上皮细胞完全培养基100mLEZ-VISIONTHREE,DNADYEASLOADINGBUFFER6XEZvision
DNA染料(三条指示带)生物技术级暗紫色,微粘稠液体COLDsigma
ART4 Others Rat 大鼠 ART4 人细胞裂解液 (阳性对照) 3-录本, 98% 3-Chlorotoluqnq 108-41-8
组织源性原代细胞Many types of cells包装:5 × 105方(1ml)/1mlTBS,20XREADY-PACKTBS 缓冲液 20X 粉末包超级白色结晶粉末RTsigma
SK细胞,人细胞 狗肾细胞隆突型,MDCK superdome细胞 少突胶质前体细胞培养基OPCM-prfN-叔丁氧羰基-L-脯酸,英文名或英文缩写:BOC-L-Proline,级别:BR,99%,规格:25克
MPC-11(小鼠浆细胞瘤) 5×106cells/瓶×24-甲氧基本胺;对甲氧基本胺;对茴香胺;对基本4-metxoxyaniline;p-Anisidine;4-AMinoan-isole;4-metxoxybenzenaMine;p-AMinopxenyl metxyl
选择抗凝的注意点:
①、每一份样本所加的抗凝剂的量要一致,同时所取的全血的量也要尽量一致;
②、收集抗凝全血后一定要轻轻颠倒,充分抗凝,防止部分血液未接触到抗凝剂而导致凝固;
③、抗凝全血收集的血浆相对较多(1ml抗凝全血能分离出0.4~0.5ml血浆);
④、抗凝收集的血浆冷冻保存后,解冻时可能会出现絮状浑浊,如有则需要离心去掉浑浊后用于测定。