H辅酶ⅠNAD测试剂盒微量法
2022-04-19
产品详情
- 产地 国产
- 产品名称H辅酶ⅠNAD测试剂盒微量法
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- 简介
【友情提示】：本产品仅供科研研究使用，不得用于人体临床直接检测。避免给您带来不必要的损失，请仔细阅读购买说明！
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产品名称
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规格
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检测方法
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货号
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H辅酶ⅠNAD测试剂盒微量法
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100管/48样
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微量法
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LZ-01321S
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商品介绍：
测定意义
辅酶ⅠNAD(H)广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中，NAD+是糖酵解（EMP）和三羧酸循环（TCA）的主要氢受体，生成的NADH经呼吸电子链（ETC）传递把电子交给氧，在合成ATP的同时，形成大量的ROS，同时NADH再生为NAD+。糖、脂、蛋白质三大代谢物质分解中的氧化反应绝大部分通过这一体系完成。NAD(H)含量和NADH/NAD+比值的高低可用于评价糖酵解和TCA循环的强弱。较高的NAD(H)及NADH/NAD+比值说明细胞呼吸耗氧量较高，处于过氧化状态。此外，NADH/NAD+比值升高也可抑制糖酵解和TCA循环。另外，NAD+降解产物对细胞信号传导、代谢和基因表达等具有重要的调控作用。
测定原理
分别用酸性和碱性提取液提取样品中NAD+和NADH，NADH通过PMS的递氢作用，还原氧化型噻唑蓝（MTT）为甲瓒，在570nm下检测吸光值；而NAD+可被乙醇脱氢酶还原为NADH，进一步采用MTT还原法检测。
需自备的仪器和用品
可见分光光度计/酶标仪、台式离心机、移液器、微量石英比色皿/96孔板、研钵、冰和蒸馏水。
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实验通用规则:
1、将液体加到酶标孔中时，避免枪头和孔内液体接触，可使枪头上的液滴和孔壁接触，液滴会自然流下去。
2、用枪吸取液体时速度不能太快，以免产生气泡而使吸取量不准确。
3、温浴时，要用不干胶或胶带纸封好酶标板，防止水分的蒸发。
4、洗液不够时，可用蒸馏水自行配制PH7.4，0.02M的磷酸缓冲液，加入0.1%的吐温20作为洗液。加入1/1000的叠氮钠后可长期保存。
5、实验时，要使底物避光保存。
6、洗板时，每次洗液加入后，应静置1分钟，使清洗更加。没有洗板机时，倒去液体后，要将酶标板在报纸或毛纸上用力拍干。
7、要在实验前1小时将试剂盒从冰箱中取出，使各种试剂都恢复到室温，以使结果更稳定。
8、吸取液体时，要用量程和需要量接近的枪去吸，减少误差。
9、要配备20ul、50ul、100ul、1000ul和排枪各一支。吸取不同的液体后，要更换枪头。即使是吸取标准品时。
10、液体全部加完后，可将酶标板在桌子上平行轻轻晃动30秒，混匀液体。也可以用酶标仪的晃动功能。
血液样本的收集：
全血根据收集的条件，分成不抗凝和抗凝两种。同时，不抗凝分离出的上层黄色的液体我们称之为血清；抗凝分离出的上层黄色的液体我们称之为血浆。
1、不抗凝收集血清:将收集好的全血,静置1～2小时，直接低速离心分离出血清待用或保存。
2、抗凝收集血浆: 收集抗凝全血，轻轻颠倒充分抗凝后，可直接低速离心分离血浆(也可静置半小时左右再低速离心分离血浆)待用或保存。根据不同抗凝剂的性能特征，选择合适的抗凝剂。实验室常用的抗凝剂有肝素的各种盐、EDTA及枸橼酸钠。
选择抗凝的注意点：
①、每一份样本所加的抗凝剂的量要一致，同时所取的全血的量也要尽量一致;
②、收集抗凝全血后一定要轻轻颠倒，充分抗凝，防止部分血液未接触到抗凝剂而导致凝固;
③、抗凝全血收集的血浆相对较多（1ml抗凝全血能分离出0.4～0.5ml血浆）;
④、抗凝收集的血浆冷冻保存后，解冻时可能会出现絮状浑浊，如有则需要离心去掉浑浊后用于测定。
ALS2CR8 肌侧索硬化2染色体区域候选蛋白8抗体
ATP6IP2 ATP酶H+转运溶酶体辅助蛋白2抗体
Azurocidin 肝素结合蛋白/阳离子蛋白37/天青杀素抗体
Alpha-Synuclein 核突触蛋白抗体
beta-Actin (Loading Control) β-肌动蛋白/β-Actin 抗体（内参抗体）
beta-Amyloid 1-42 (CT) β淀粉样肽1-42(C端)/β-Amyloid 1-42 (CT)抗体
beta Amyloid 1-16 β淀粉样肽1-16/Aβ1-16抗体
beta Amyloid 1-28 β淀粉样肽1-28/β-Amyloid 1-28抗体
ARIP2a 激活素受体2A抗体
Aquaporin 5 水通道蛋白5抗体
beta Amyloid 1-40 β淀粉样肽（1-40）抗体
beta Amyloid 1-42 β淀粉样肽（1-42）抗体
APOA1 载脂蛋白A1抗体
Beta-arrestin 1 β-抑制蛋白1抗体
Ankyrin B 锚定蛋白B抗体
ATP7A 铜转运蛋白质α链抗体
Amphetamine(2A3F) 克隆/ASMTL ASMTL蛋白抗体
TRA16 激素受体相关蛋白16抗体
人胚胎心肌组织来源细胞；CCC-HEH-2
人胚胎肠粘膜组织来源细胞；CCC-HIE-2
人胚胎组织来源细胞；CCC-HPE-2
人胚胎肌肉组织来源细胞；CCC-HSM-2
人葡萄膜黑色素细胞；UM
人胚；WI-38 [WI38]
SV40T转化的人胚肾细胞（亚系）；293T/17
293来源病毒包装细胞；ΦA
293来源病毒包装细胞；ΦA-GP
人永生化表皮细胞；HaCaT
SV-40转化；WI38/VA13
人乳腺上皮细胞；MCF-10A
人胚；MRC-5
人胚肺二倍体细胞；2BS
人胚肺二倍体细胞；KMB-17
人胚肾细胞；293 [HEK-293]
人脐内皮细胞；HUV-EC
人肺细胞；HLF-a
人胚；WI-38 [WI38]
人胎儿胸腺细胞株；HFT-8810 [HFT8810]
人胚；HFL1
H辅酶ⅠNAD测试剂盒微量法人胚肾细胞；293 [HEK-293]
人羊膜细胞；HA
人胚；HFL-I
操作步骤:
实验开始前，各试剂均应平衡至室温（试剂不能直接在37℃溶解）；试剂或样品稀释时，均需混匀，混匀时尽量避免起泡。实验前应预测样品含量，如样品浓度过高时，应对样品进行稀释，以使稀释后的样品符合试剂盒的检测范围，计算时再乘以相应的稀释倍数。
1. 加样：分别设空白孔、标准孔、待测样品孔。空白孔加样品稀释液100μl，余孔分别加标准品或待测样品100μl，注意不要有气泡，加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀，酶标板加上盖或覆膜，37℃反应120分钟。为保证实验结果有效性，每次实验请使用新的标准品溶液。
2. 弃去液体，甩干，不用洗涤。每孔加检测溶液A工作液 100μl（在使用前一小时内配制），酶标板加上覆膜, 37℃反应60分钟。
3. 温育60分钟后，弃去孔内液体，甩干，洗板3次，每次浸泡1-2分钟，大约400μl/每孔，甩干（也可轻拍将孔内液体拍干）。
4. 每孔加检测溶液B工作液（同检测A工作液） 100μl，酶标板加上覆膜37℃反应60分钟。
5. 温育60分钟后，弃去孔内液体，甩干，洗板5次，每次浸泡1-2分钟，350μl/每孔，甩干（也可轻拍将孔内液体拍干）。
6. 依序每孔加底物溶液90μl，酶标板加上覆膜37℃避光显色（30分钟内，此时肉眼可见标准品的前3-4孔有明显的梯度兰色，后3-4孔梯度不明显，即可终止）。
7. 依序每孔加终止溶液50μl，终止反应，此时蓝色立转黄色。终止液的加入顺序应尽量与底物液的加入顺序相同。为了保证实验结果的准确性，底物反应时间到后应尽快加入终止液。
8. 用酶联仪在450nm波长依序测量各孔的光密度（OD值）。在加终止液后立即进行检测。
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