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人胚胎干细胞；SH.hEXl(46.xx)传代方法
2024-09-24
在深入探讨SH.hEXl(46.xx)人胚胎干细胞系的传代方法时，我们不得不强调无菌操作与精确控制环境条件的重要性。为了维持这些细胞的遗传稳定性和增殖潜能，每一步操作都需细致入微。
传代前，首先确保培养箱内的温度稳定在37°C，并含有5%的CO?，以模拟体内环境。随后，使用无菌技术从培养瓶中轻柔吸出旧培养基，避免对细胞层造成机械损伤。接下来，以适量的磷酸盐缓冲液（PBS）轻轻洗涤细胞表面，去除残留的培养基和死细胞，此步骤重复两次以确保清洁。
随后，加入适量的胰蛋白酶-EDTA溶液，覆盖细胞层并置于培养箱中短暂孵育，具体时间需根据细胞贴壁强度调整，以刚好使细胞呈单细胞悬液状态为宜。通过显微镜观察，一旦细胞开始变圆并轻轻脱离培养皿底部，立即加入等体积的含血清培养基中止胰酶作用，并轻柔吹打使细胞完全分散。
之后，根据实验需求，将细胞悬液按一定比例稀释后接种到新的培养瓶中，补加新鲜培养基至适当体积，并轻轻晃动培养瓶使细胞均匀分布。完成这一系列操作后，将培养瓶重新放回培养箱中继续培养，定期检查细胞生长状态，适时进行换液和传代操作，以确保SH.hEXl(46.xx)人胚胎干细胞系的健康与活力。
值得注意的是，传代过程中还需密切关注细胞的形态学变化，如出现异常增殖、分化或污染迹象，应及时采取措施处理，以维护细胞系的纯度和功能特性。此外，建立详细的操作记录和质量控制体系也是不可或缺的，它们为科研工作的连续性和可重复性提供了重要保障。
产品仅用于科研收到细胞后，取出培养瓶在倒置显微镜下观察细胞生长情况。
（一）如果细胞未长满，用75%酒精喷洒整个瓶消毒后放到超菌台内，严格无菌操作，打开细胞培养瓶，吸出培养液，仅留下10ml培养液在瓶内继续培养。。
（二）如果细胞已长满，即可进行传代培养。具体步骤如下：
1. 弃去培养液，用PBS（不含钙，镁离子）洗1-2次。
2. 加1ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，倒转放于37度培养箱1-3分钟预热，然后又将培养瓶倒转大约30秒后，在倒置显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆分散，轻敲几下培养培养瓶，细胞随即脱落下来。
3. 加入6-8ml完全培养基，吸出，分到新的培养瓶中。一传二。
注意：传代后一半用我们的培养基，一半用你们的，以免细胞不适应而造成生长不好。
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